WWW.PDF.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Разные материалы
 

«ВВЕДЕНИЕ Блокирование вирус-клеточного взаимодействия природными или синтетическими аналогами клеточных рецепторов, взаимодействующими с ...»

WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007

Дата поступления: 15.11.2006.

ВИРУЛИЦИДНОЕ ДЕЙСТВИЕ НИЗКО- И ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ

ПОЛИВАЛЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА.

С.В.Рак, Е.П.Гончарова, Л.Е.Булычев, И.В.Виноградов, Е.И.Рябчикова, А.Б.Рыжиков.

Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр

вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора 630559, Кольцово, Новосибирская обл., Россия ВВЕДЕНИЕ Блокирование вирус-клеточного взаимодействия природными или синтетическими аналогами клеточных рецепторов, взаимодействующими с рецептор-связывающим участком вирусного белка гемагглютинина является одним из возможных подходов к разработке средств профилактики гриппозной инфекции. Существуют природные ингибиторы связывания вируса гриппа с клеточными рецепторами - сиалоолигосахариды, присутствующие на поверхности эпителия респираторного тракта человека (муцины) [1,2]. Однако, как показали эксперименты на культуре клеток MDCK, вируснейтрализующая активность муцинов мала в сравнении с полимерным ингибитором на основе полиакриламида [3]. Поливалентные ингибиторы на основе сиаловой кислоты являются более эффективными по сравнению с моновалентными аналогами, поскольку процесс взаимодействия вириона гриппа с клеткой характеризуется многоточечным кооперативным связыванием молекул гемагглютинина вируса с сиалоолигосахаридными остатками рецепторов клеточной поверхности [4-6].

Так, поливалентные ингибиторы в виде линейных сиалилгликополимеров [3, 7-12], полимерных дендримеров [13-15], самособирающихся гликопептидов [16,17], и сиалосодержащих липосом [18] обладали аффинностью связывания с молекулами гемагглютинина вируса гриппа на несколько порядков выше по сравнению с моновалентными соединениями. Наряду с высокой эффективностью, применение высокомолекулярных поливалентных ингибиторов на основе полимеров имеет ряд ограничений, связанных с возможной токсичностью, иммуногенностью и неполной биодеградацией полимеров. В связи с этим, разработка низкомолекулярных поливалентных ингибиторов является наиболее привлекательным вариантом для создания профилактических и терапевтических препаратов [19].

Целью настоящей работы является сравнительное изучение эффективности и выяснение механизмов действия низко- и высокомолекулярных поливалентных ингибиторов гемагглютинина вируса гриппа. В качестве ингибиторов гемагглютинина использовали два производных сиалоолигосахарида 6-sialyl(N-acetyllactosamine) WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

фрагмента рецептора вируса гриппа на клетке: высокомолекулярное полимерное соединение на основе полиакриламида (PAA-6’SLN (1000 кДа) с линейной структурой, и низкомолекулярное соединение на основе аминокапроновой кислоты (tetra-Aca6-6’SLN), которое представляет собой тетравалентный сиалозидный ингибитор, в молекуле которого расстояние между сиаловыми кислотами соответствует расстоянию между рецепторными сайтами молекул гемагглютинина на оболочке вируса гриппа. Соединение способно связываться с гемагглютинином вируса гриппа на несколько порядков сильнее, чем природный олигосахарид 6’SLN, а также обладает максимальной аффинностью связывания среди изученных аналогов [9,19-21].

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Вирус. Использовали вирус гриппа штамм A/Aichi/2/68, полученный из Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, и прошедший 2 пассажа на мышах и 3 пассажа на культуре клеток MDCK.

Ингибиторы гемагглютинина вируса гриппа. Низкомолекулярное соединение tetraAca6-6’SLN, представляющее собой производное сиалоолигосахарида 6’SLN в виде тетрамера на основе аминокапроновой кислоты и соединение PAA-6’SLN (1000 кДа) с линейной структурой на оcнове полиакриламида были разработаны и любезно предоставлены лабораторией карбогидратных соединений под руководством проф.

Н.В.Бовина (Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова, РАН, г. Москва).

Метод негативного контрастирования. Исследование влияния ингибиторов гемагглютинина вируса гриппа на морфологию вирионов гриппа проводили методом негативного контрастирования суспензии интактного вируса гриппа (108TCID50/мл), и образцов суспензии, проинкубированных в присутствии ингибиторов PAA-6’SLN и tetraAca6-6’SLN в концентрациях 1 и 10 мкг/мл в течение 30 мин при комнатной температуре.

Исследуемые образцы (20 мкл) сорбировали на опорные электронно-микроскопические сетки, покрытые формваровой пленкой, в течение 1,5 минут, остаток жидкости убирали, сетку высушивали. Сетку помещали в контрастирующий раствор (2 % раствор фосфорновольфрамовой кислоты в дистиллированной воде) на 45 секунд, остаток раствора убирали, сетку высушивали. Образцы (по 4-6 сеток) изучали в трансмиссионном электронном микроскопе Hitachi-H800, при увеличениях от 10 000 до 200 000. Измерение размеров вирусных частиц проводили на негативах с известным увеличением.

Тест ингибирования инфекционности вируса гриппа in vitro по уменьшению количества фокус-образующих единиц на монослое клеток MDCK. Для постановки реакции использовали монослой клеток MDCK в 96-луночных планшетах. Из лунок с WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

монослоем клеток удаляли ростовую среду и монослой промывали два раза средой для разведения вируса (40 мкл трипсина ТРСК на 20 мл среды ИГЛА ДМЕМ). Серийные двукратные разведения исследуемых ингибиторов на среде для разведения вируса, начиная с концентрации 0,2 мг/мл, наносили по 100 мкл в соответствующие лунки с монослоем MDCK и инкубировали 20 мин при 35oC, 5% CO2.

После инкубации ингибиторов в исследуемых разведениях в соответствующие лунки добавляли по 100 мкл вирусного материала (в разведении с активностью 100-200 фокусообразующих единиц на лунку), инкубировали в течение 1 часа при 35oC, 5% CO2.

Затем вирусную суспензию заменяли поддерживающей средой (200 мкл), и планшет инкубировали при 35oC, 5% CO2 в течение 18 ч. Для выявления инфицированных клеток удаляли питательную среду из лунок с последующей двукратной промывкой в фосфатном буферном растворе (ФБР). Монослой фиксировали добавлением охлажденного ацетона по 100 мкл на лунку в течение 10-15 мин. После удаления ацетона лунки дважды ополаскивали ФБР и монослой обрабатывали препаратом моноклональных антител к белку NP вируса гриппа А (дар д-ра Климова А.И., CDC, Atlanta), инкубировали 30 мин, промывали лунки 4 раза и обрабатывали аффинно очищенными, конъюгированными с пероксидазой хрена антителами козы против IgG мыши (Sigma). Наличие пероксидазы в комплексах на поверхности инфицированных клеток проявляли в ферментативной реакции с хромогенным субстратом 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC) (Sigma). Через 30 мин инкубации субстратный раствор заменяли ФБР, и окрашенные клетки учитывали в микроскопе. 50%-ную ингибирующую концентрацию (IC50) определяли как концентрацию препарата, при которой количество окрашенных клеток (фокусов) в лунке уменьшается на 50%. Расчет IC50 был проведен с использованием программы Статистика+ 3.5.0 beta методом пробит-анализа (http://www.statplus.nm.ru/).

Определение инфекционной активности вируса гриппа на культуре клеток MDCK.

Готовили серийные 10-кратные разведения вируса из исследуемой пробы и наносили по 200 мкл на монослой клеток MDCK в 96–луночных планшетах. Через 72 часа инкубации из каждой лунки отбирали образцы культуральной жидкости объёмом 50 мкл и определяли наличие вируса гриппа по гемагглютинирующей активности в каждом образце при добавлении 50 мкл 1% суспензии эритроцитов кур при температуре 4oC.

Расчет концентрации вируса проводили по методу Спирмена-Кербера по результатам титрования последовательных разведений вирусной суспензии на культуре клеток MDCK.

Концентрация вируса, при которой обнаруживается реакция гемагглютинации в 50% лунок с инфицированным монослоем, принимали за единицу инфекционной активности (TCID50) на культуре клеток MDCK.

WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

Метод оценки ингибирования инфекционности вируса гриппа in vivo. Для изучения противовирусного действия ингибиторов in vivo на мышах использовали модель одновременного интраназального введения вируса и ингибитора животным [11,22]. В качестве лабораторной модели использовали мышей ICR весом 14-16 г, полученных из питомника ФГУН ГНЦ ВБ “Вектор”. Работы с животными проводили в соответствии с протоколом, утвержденным биоэтической комиссией ФГУН ГНЦ ВБ “Вектор”.

Ингибиторы tetra-Aca6-6’SLN и PAA-6’SLN в концентрации 20, 100 и 500 мкг/мл и вирус A/Aichi/2/68 из расчета 1-2 ИД50 инкубировали совместно при комнатной температуре в течение 30 минут, а затем вводили интраназально по 40 мкл мышам, находящимся под эфирным наркозом. Через 3 суток после интраназального заражения мышей подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации, извлекали легкие из каждой мыши, гомогенизировали раздельно, центрифугировали при 5000 об/мин, и супернатант хранили при -70oC с последующим титрованием на культуре клеток MDCK. Определяли концентрацию вируса гриппа в легких каждой мыши методом определения инфекционной активности вируса на культуре клеток MDCK. Мышь, у которой в легких обнаруживали вирус в любой концентрации, считалась заболевшей. Расчет интраназальной инфицирующей дозы ID50 для мышей ICR, которая равна дозе вируса, при которой вирус выделяется из легких 50% экспонированных мышей, был проведен с использованием программы Статистика+ 3.5.0 beta методом пробит-анализа (Метод Финни) (http://www.statplus.nm.ru/).

РЕЗУЛЬТАТЫ Для оценки эффективности ингибиторов гемагглютинина in vitro методом ингибирования фокусообразующей активности вируса гриппа на монослое клеток MDCK определяли концентрацию ингибиторов, при которой инфекционность штамма A/Aichi/2/68 подавляется на 50% (IC50). Величина IC50 составила 0,10 µM (95% доверительный интервал 0,07-0,12 µM) для РАА-6’SLN и 0,03 µM (95% доверительный интервал 0,02-0,06 µM) для tetra-Aca6-6’SLN.

Эффективность ингибиторов гемагглютинина вируса гриппа оценивали на мышах, развитие инфекционного процесса определяли по накоплению вируса в легких животных через 3 суток после заражения. Концентрацию ингибитора в серозной жидкости легких мышей рассчитывали исходя из того, что после интраназального введения 40 мкл раствора ингибитора в легкие попадает 10% от этого объема, т.е. 4 мкл, которые растворяются в 27 мкл серозной жидкости [23]. Приведенные в табл.1 данные свидетельствуют в пользу эффективного применения обоих ингибиторов in vivo на мышах. В группе из 10 животных одна мышь оказывалась заболевшей при введенной расчетной концентрации ингибитора в WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

серозной жидкости легких, равной 1,6 µM tetra-Aca6-6’SLN или 8,8 µM PAA-6’SLN, в контрольных группах соотношение количества заболевших/экспонированных мышей составило 6/10 и 5/10 (1-2 ИД50). Интраназальное введение 0,25 мг/кг tetra-Aca6-6’SLN, что соответствует 8,2 µM в серозной жидкости легких, предотвращало развитие заболевания у мышей при заражении вирусом гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2). В случае ингибитора PAA-6’SLN для достижения такого же эффекта требовалась концентрация препарата примерно в 5 раз больше по сравнению с tetra-Aca6-6’SLN.

–  –  –

Электронно-микроскопическое исследование выявило повреждающее действие ингибиторов гемагглютининиа вируса гриппа на морфологию вирионов (см. рис.1.а-е).

Ингибитор PAA-6’SLN в концентрации 1 мкг/мл (0,69 µM) вызывал агрегирование вирионов и отчетливые нарушения строения некоторых вирусных частиц, характеризующиеся разрывами вирусных оболочек и проникновением контрастирующего вещества внутрь вириона (см. рис.1.б). Увеличение концентрации PAA-6’SLN до 10 мкг/мл (6,9 µM) приводило к полному разрушению большинства вирионов и существенному уменьшению размеров сохранившихся вирусных частиц (см. рис.1.в) по сравнению с интактным вирусом (см. рис.1.а). При обработке вируса гриппа ингибитором tetra-Aca6-6’SLN в концентрации 1 мкг/мл (0,64 µM) наблюдали образование небольших плотных скоплений вирионов (см. рис.1.г). В результате инкубирования с большей WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

концентрацией ингибитора tetra-Aca6-6’SLN (10 мкг/мл) регистрировали ярко выраженное повреждающее действие на частицы вируса гриппа, сохранялись лишь единичные целые вирионы, с гладкой поверхностью, без пепломеров (см. рис.1.д,е). Таким образом, ингибиторы гемагглютинина tetra-Aca6-6’SLN и PAA-6’SLN в концентрации 10 мкг/мл вызывали деструкцию подавляющего числа вирионов в образцах вируса гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2).

Рис.1. Частицы вируса гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2). а – контрольный образец; б образец, обработанный 1 мкг/мл ингибитора РАА-6’SLN; в - образец, обработанный 10 мкг/мл ингибитора РАА-6’SLN; г - образец, обработанный 1 мкг/мл ингибитора tetra-Аса6SLN; д, е - образец, обработанный 10 мкг/мл ингибитора tetra-Аса6-6’SLN. Масштабная полоска – 100 нм (а,б,г,е), 50 нм (в,д).

WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

ОБСУЖДЕНИЕ Проведенное сравнительное изучение эффективности низко- и высокомолекулярных ингибиторов гемагглютинина вируса гриппа выявило более высокую противовирусную активность низкомолекулярного четырехвалентного сиалозида tetra-Aca6-6’SLN по сравнению с высокомолекулярным соединением на основе полиакриламида PAA-6’SLN (1000кДа) в тестах ингибирования инфекционности вируса гриппа на культуре клеток MDCK и на мышах.

Согласно результатам, полученным методом ингибирования фокусообразующей активности вируса гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2) на культуре клеток MDCK, 50%-ная ингибирующая концентрация составила 0,03 µM для низкомолекулярного соединения tetra-Aca6-6’SLN и 0,1 µM для высокомолекулярного PAA-6’SLN (1000 кДа). Полученные данные не противоречат результатам, опубликованным ранее [3], где величина IC90 PAA-6’SLN (1500 кДа), полученная на культуре клеток MDCK, составила 0.05 и 0.5 µM для штаммов A/NIB/23/89M (H1N1) и A/NIB/26/90M (H3N2) соответственно.

При исследовании эффективности ингибиторов гемагглютинина in vivo, нами была использована модель интраназального введения смеси вируса и ингибитора вируса, предложенная в работе [13] для изучения полимера G4-SA (полиамидоаминового дендримера, конъюгированного с сиаловой кислотой) в качестве ингибитора гемагглютинина вируса гриппа. Авторы регистрировали лечебный эффект, учитывая выживших и погибших мышей от вируса гриппа A Х-31 (A/Aichi/2/68 х A/PR/8/34 (H3N2)). 50%-ная эффективная доза G4-SA для мышей CD-1 при одновременном введении в смеси с 2 LD100 вируса A Х-31 составила 0,96 мг/кг. В нашем случае, интраназальное введение 40 мкл ингибиторов tetra-Aca6-6’SLN или PAA-6’SLN в концентрации 20 мкг/мл, что соответствует 0,05 мг/кг, защищало 9 из 10 мышей в случае tetra-Aca6-6’SLN и 8 из 10 мышей в случае PAA-6’SLN от заражения 1-2 ИД50 вируса A/Aichi/2/68. В группах, где животным вводили по 0,25 мг/кг tetra-Aca6-6’SLN или 1,25 мг/кг PAA-6’SLN, у всех инфицированных животных вирус гриппа в легких не обнаруживали.

Изучение морфологии вируса гриппа в присутствии низко- и высокомолекулярных ингибиторов гемагглютинина позволило прояснить механизмы противовирусного действия ингибиторов. Ингибирование инфекционности вируса гриппа на культуре клеток MDCK происходило при малых концентрациях ингибиторов, при которых, согласно морфологическим исследованиям, tetra-Aca6-6’SLN и PAA-6’SLN вызывали агрегирование вирионов гриппа. Можно предположить, что в ингибировании вирусклеточного взаимодействия изучаемыми ингибиторами гемагглютинина важную роль WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

играет блокирование рецептор-связывающего сайта на тримере гемагглютинина и агрегирование вирионов гриппа за счет поливалентности ингибиторов. Для проявления противовирусной активности in vivo на мышах были необходимы более высокие концентрации ингибиторов, приводящие к полной деструкции вирусных частиц. При этом, вирулицидное действие высокомолекулярного ингибитора PAA-6’SLN начинало проявляться при концентрации 1 мкг/мл (0,69 µM), в то время как низкомолекулярный ингибитор tetra-Aca6-6’SLN при такой же концентрации вызывал лишь слабую агрегацию вирионов. Выявленное различие может быть обусловлено особенностями структуры ингибиторов гемагглютинина. Высокомолекулярный ингибитор PAA-6’SLN при малой концентрации способен приводить к деструкции отдельных вирионов за счет многоточечного связывания и “стягивания” молекул гемагглютинина, приводящего к нарушению целостности оболочки вириона. В отличие о этого, низкомолекулярный тетравалентный ингибитор tetra-Aca6-6’SLN при малых концентрациях, по-видимому, равномерно распределяется по вирионам, используя возможности как внутри-, так и межмолекулярного связывания с тримерами гемагглютинина. Такое взаимодействие при малых концентрациях ингибитора не приводит к существенному повреждению вирионов, однако блокирует рецептор-связывающие сайты на поверхности вириона, и тем самым уменьшает инфекционность вируса in vitro. При более высоких концентрациях наблюдается пороговый эффект разрушения всех вирионов за счет кооперативного действия молекул tetra-Aca6-6’SLN.

Таким образом, проведенное исследование свидетельствует о перспективности низкомолекулярного поливалентного ингибитора tetra-Aca6-6’SLN и высокомолекулярного поливалентного ингибитора PAA-6’SLN (1000кДа) для разработки противогриппозных препаратов специфического вирулицидного действия.

ВЫВОДЫ

1. Величина 50%-ной ингибирующей концентрации IC50 на культуре клеток MDCK составляет 0,03 µM для низкомолекулярного ингибитора гемагглютинина tetra-Aca6-6’SLN и 0,1 µM для высокомолекулярного ингибитора гемагглютинина PAA-6’SLN (1000 кДа).

2. Показано, что интраназальное введение 0,25 мг/кг tetra-Aca6-6’SLN или 1,25 мг/кг PAA-6’SLN предотвращает развитие заболевания у мышей при заражении вирусом гриппа штамм A/Aichi/2/68 (H3N2).

3. Электронно-микроскопическое исследование морфологии частиц вируса гриппа методом негативного контрастирования выявило вирулицидное действие ингибиторов гемагглютинина tetra-Aca6-6’SLN и PAA-6’SLN (1000 kDa), приводящее к полной деструкции частиц вируса гриппа при концентрации ингибиторов 10 мкг/мл.

WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

Список литературы.

1. Lamblin, G., Roussel, P. Airway mucins and their role in defense against micro-organisms.// Respir. Med.-1993. -V.87- P.421-426.

2. Lamblin, G., Degroote, S., Perini, J.-M. et al Human airway mucin glycosylation: a combinatory of carbohydrate determinants which vary in cystic fibrosis.// Glycoconj. J.- 2001.V.18 - P.661-684.

3. Gambaryan A.S., Boravleva E.Y., Matrosovich T.Y. et al Polymer-bound 6’sialyl-Nacetyllactosamine protects mice infected by influenza virus. // Antiviral Research - 2005.- V.68.P.116-123.

4. Matrosovich M.N. Towards the development of antimicrobial drugs acting by inhibition of pathogen attachment to host cells: a need for polyvalency. //FEBS Lett - 1989. - V. 252 - P.1-4

5. Kiessling L.L., Gestwicki J.E. and Strong L.E. Synthetic multivalent ligands in the exploration of cell-surface interactions. // Current Opinion in Chemical Biology - 2000.- V.4. - P.696-703

6. Kiessling L.L. and Pohl N.L. Strength in numbers: non-natural polyvalent carbohydrate derivatives. //Chemistry and Biology - 1996.-V.3 -P.71-77.

7. Gambaryan A.S., Tuzikov A.B., Chinarev A.A. et al Polymeric inhibitor of influenza virus attachment protects mice from experimental influenza infection.//Antiviral Research - 2002.V.55.- P.201-205

8. Matrosovich M.N., Mochalova L.V., Marinina V.P., Byramova N.E., Bovin N.V. Synthetic polymeric sialoside inhibitors of influenza virus receptor-binding activity. // FEBS Lett-1990. V. 272 - P. 209–211

9. Mochalova L.V., Tuzikov A.B., Marinina V.P et al Synthetic polymeric inhibitors of influenza virus receptor-binding activity suppress virus replication. // Antiviral Res-1994.-V.23 - P.179Totani K., Kubota T., Kuroda T. et al Chemoenzymatic synthesis and application of glycopolymers containing multivalent sialooligosaccharides with a poly(L-glutamic acid) backbone for inhibition of infection by influenza viruses. //Glycobiology - 2003. - V.13 - N.5P.315-326

11. Lees W.J., Spaltenstein A., Kingery-Wood J.E., Whitesides G.M. Polyacrylamides bearing pendant alpha-sialoside groups strongly inhibit agglutination of erythrocytes by influenza A virus: multivalency and steric stabilization of particulate biological systems. //J. Med. Chem V. 37- P.3419–3433.

12. Mammen M., Dahmann G., Whitesides G.M. Effective inhibitors of hemagglutination by influenza virus synthesized from polymers having active ester groups. Insight into mechanism of inhibition.// J. Med. Chem. - 1995. – V.38 – P.4179–4190 WWW.MEDLINE.RU ТОМ 8, ВИРУСОЛОГИЯ, МАРТ 2007 Дата поступления: 15.11.2006.

13. Landers J.J., Cao Z., Lee I.et al Prevention of influenza pneumonitis by sialic acidconjugated dendritic polymers. //J. Infectious Diseases-2002.- V.186.- P.1222-1230

14. Reuter, J.D., Myc, A., Hayes, M.M., et al Inhibition of viral adhesion and infection by sialicacid-conjugated dendritic polymers. //Bioconjug. Chem. –1999.-V.10.-P.271–278.

15. Tsvetkov, D.E., Cheshev, P.E., Tuzikov, A.B. et al Neoglycoconjugates based on dendrimer poly(aminoamides). //Russ. J. Bioorgan. Chem.–2002. -V.28 - P.470–486.

16. Bovin, N.V., Tuzikov, A.B., Chinarev, A.A., Gambaryan, A.S. Multimeric glycotherapeutics: new paradigm. // Glycoconj. J. – 2004.-V.21-P.471–478.

17. Tuzikov, A.B., Chinarev, A.A., Gambaryan, A.S. et al. Polyglycine II nanosheets:

supramolecular antivirals? //Chem.BioChem.- 2003. – V.4 - P.147–154.

18. Guo, C.T., Sun, X.L., Kanie, O. An O-glycoside of sialic acid derivative that inhibits both hemagglutinin and sialidase activities of influenza viruses. // Glycobiology –2002.- V.12- P.83– 190.

19. Chinarev A.A., Tuzikov A.B., Gambarian A.S., et al. Tetravalent blockers for influenza virus hemagglutinin. // In: Inoue, Y., Lee, Y.C., Troy II, F.A. (Eds.). Sialobiology and Other Novel Forms of Glycosylation. Gakushin Publishing Co., Osaka, Japan.-1999.-P. 135-143.

20. Bovin, N.V. Polyacrylamide-based glycoconjugates as tools in glycobiology.// Glycoconj. J.

- 1998. – V.15.- P.431–446.

21. Mochalova L.V., Gambaryan A.S., Romanova J. et al. Receptor-binding properties of modern human influenza viruses primarily isolated in Vero and MDCK cells and chicken embryonated eggs.//Virology. – 2003. – V.313. – P.473–480.

22. Donovan B.W., Reuter J.D.,Cao Z., Myc A., Johnson K.J., Baker J.R. Prevention of murine influenza A virus pneumonitis by surfactant nano-emulsions.//Antiviral Chemistry & Chemotherapy.-2000.- V.11. – P.41-49.

23. Ito R., Ozaki Y.A., Yoshikawa T. et al. Roles of anti-hemagglutinin IgA and IgG antibodies in different sites of the respiratory tract of vaccinated mice in preventing lethal influenza

Похожие работы:

«И.И. Горбатова Театр на перекрестке дорог (часть 2)1 Ил. 1. Олег Табаков и Марк Захаров: «Сегодня для репертуарного театра трудное время». «Мне интересна жизнь человека.» В 2000 г. крит...»

«Корпоративные практики социальной направленности Образование и обучение ОАО «Северсталь» Программа развития молодых сотрудников с высоким лидерским потенциалом Talent Pool Сборник социальных программ ОАО «Северсталь» Программа развития молодых сотрудников с высоким лидерским потенциалом Talent P...»

«Дело «Саади (Saadi) против Италии» Принято Европейским судом по правам человека По делу Саади против Италии Европейский суд по правам человека, заседая Большой палатой в составе: Жана-Поля Коста, Председателя Палаты, Христоса Розакиса, сэра Николаса Братца, Боштьяна Цупанчича, Пэра Лоренсена, Франсуазы Тюлькенс, Лукиса Лукаидеса, Корнелиу Бырсана, Нины В...»

«Гневашева В.А. Молодежь России: особенности профессионального становления Москва 2012 Книга подготовлена при поддержке РГНФ Издание осуществлено при поддержке Российского гуманитарного научного фонда (РГНФ №12-42-93021 к «Подготовка научно...»

«Морфология корня. Морфология побега. метаморфозы Корень – осевой орган, обладает радиальной симметрией и неограниченно долго может расти в длину. Главная функция корня – поглощение воды и минеральных веществ. Кроме этой, корни могут выполнять и другие функции:укрепление растения в почве;синтез различных веществ и их транс...»

«Автоматизированная копия 586_472147 ВЫСШИЙ АРБИТРАЖНЫЙ СУД РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ Президиума Высшего Арбитражного Суда Российской Федерации № 16618/12 Москва 28 мая 2013 г. Президиум Высшего Арбитражного Суда Российской Федерации...»

«ПРОГРАММА вступительных испытаний (профильного экзамена) для поступающих на обучение по направлению подготовки 35.04.04 «Агрономия» Генетика Молекулярная структура гена. Путь от гена к признаку (свойству). 1. Единообразие F1. Генетический анализ. Учет и использо...»

«ЧТО ТАКОЕ ГОРНОЕ ДЕЛО: ОТ ДРЕВНОСТИ ДО СОВРЕМЕННОСТИ Аркадий Давидкович Цель настоящей статьи – показать, по каким побуждающим причинам, в каких направлениях и по каким принципам развивалось и развивается горное дело (ГД); этапы его развития, горные традиции, особенности горного образования и горной наук...»

«УНИКАЛЬНЫЙ РЕЗЕРВАТ СТЕПНОЙ ФЛОРЫ «СИНИЙ СЫРТ» О.А. Кузовенко, А.Е. Кузовенко Самарский государственный университет, г. Самара stipa4@yandex.ru Самарский зоологический парк, г. Самара prirodnick@yandex.ru Проектируемый заказник «Синий Сырт» расположен в восточной части междуречья Большого Иргиза и его притока р. Росташ...»





















 
2017 www.pdf.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - разные матриалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.