WWW.PDF.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Разные материалы
 

«Новосибирск 2010 Эмбриональные стволовые клетки человека Лагарькова Мария Андреевна Институт общей генетики РАН Москва Стволовые клетки, это клетки, которые способны к: 1. Симметричному ...»

Новосибирск 2010

Эмбриональные стволовые

клетки человека

Лагарькова Мария Андреевна

Институт общей генетики РАН

Москва

Стволовые клетки, это клетки, которые

способны к:

1. Симметричному самообновлению

2. Дифференцируются во многие типы

клеток

Valentin Haecker Александр Максимов

first use of the term “stem cell” 1905-1908 термин стволовая клетка

Определения

Тотипотентные– (полностью, лат)

дифференцировка в трофоэктодерму, ткани Зигота эмбриона и постэмбриональные ткани 3х зародышевых листков.

Плюрипотентные – (много, греч.) Эмбриональные дифференцировка в ткани эмбриона и стволовые клетки постэмбриональные ткани 3х зародышевых слоев.

Мультипотентные – (много, лат.) Соматические дифференцировка в ткани внутри стволовые клетки зародышевых листков ?????

Олигопотентные – (несколько, греч.) Гемопоэтические, дифференцировка в разные клетки в нейральные пределах определенной ткани Предшественники – дифференцировка в Гемопоэтические, определенные клетки в пределах нейральные определенной ткани Цитирований в Pubmed на поиск «Human Embryonic Stem Cells»

ПЛЮРИПОТЕНТНЫЕ КЛЕТКИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

Эмбриональные Индуцированные ЭСК, полученные Межклеточные гибриды стволовые клетки (ЭСК) плюрипотентные при переносе соматического эмбриональных 1981 мышь стволовые клетки ядра в ооцит стволовых и соматических клеток 1998 человек 2006 В 1999 году Science назвал получение Получение эмбриональных стволовых клеток линий ЭСК величайшим достижением биологии ХХ века James Thomson 1998 University of Wisconsin-Madison



• ЭСК произошли из внутренней клеточной массы бластоцисты

• способны к неограниченному числу делений без дифференцировки,

• имеют полный (диплоидный) набор хромосом и сохраняют кариотип.

• плюрипотентны – способны дифференцироваться в клетки всех трех зародышевых листков.

Что в эмбриональных стволовых клетках хорошего?

Зачем нужны дифференцированные производные ЭСК?

Trounson A, 2006 Получение линий ЭСК человека

–  –  –

Тератомы, сформировавшиеся после введения ЭСК иммунодефицитным nu/nu мышам

• Что в эмбриональных стволовых клетках плохого?

• • Трудно получать и культивировать • • Трудно дифференцировать в чистую популяцию необходимых клеток • • Потенциально туморогенны ????

• *Wakitani S et al.; “Embryonic stem cells injected into the mouse knee joint form teratomas and subsequently destroy

• the joint”; Rheumatology 42, 162-165; January 2003 • • Функциональность дифференцированных производных сомнительна • *Hansson M et al., “Artifactual insulin release from differentiated embryonic stem cells”, Diabetes 53, 2603-2609,

• October 2004 • *Sipione S et al., “Insulin expressing cells from differentiated embryonic stem cells are not beta cells”, Diabetologia 47, • 499-508, 2004 (published online 14 Feb 2004) • *Rajagopal J et al.; “Insulin staining of ES cell progeny from insulin uptake”; Science 299, 363; 17 Jan 2003 • *Zhang YM et al.; “Stem cell-derived cardiomyocytes demonstrate arrhythmic potential”; Circulation 106, 1294-1299;

• 3 September 2002 • • Проблема иммуносовместимости • • Нестабильный геном • *Cowan CA et al., “Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts”, New England Journal of

• Medicine 350, 13; published online 3 March 2004 • *Draper JS et al., “Recurrent gain of chromosomes 17q and 12 in cultured human embryonic stem cells”, Nature

• Biotechnology 22, 53-54; January 2004 • *Humpherys S et al.; “Epigenetic instability in ES cells and cloned mice”; Science 293, 95-97; 6 July 2001 • • Этические проблемы ЭСК и ВКМ это не одно и то же “… indefinite long term culture of hES cells in vitro is an abnormal condition;

in vivo, the cells of the late inner cell mass or early primitive ectoderm, to which hES cells correspond, do not persist but disappear as embryogenesis progresses: adaptation to in vitro conditions should be expected” P.Andrews. Nat. Biotech.2004

–  –  –

Использование сред с охарактеризованным составом позволяет осуществлять длительное культивирование ЭСК с сохранением их стабильного кариотипа.

Кариотипический контроль необходим!

«Двойная волна» метилирования генома в гаметогенезе и в раннем эмбриогенезе ЭСК получают в момент драматических эпигенетических изменений.

Вариабельность между линиями неизбежна

–  –  –

Экспрессия генов DPPA3 и DPPA5 не зависит от статуса метилирования их регуляторных районов, что может объяснять их реактивацию при SCNT Полученные по одному протоколу линии ЭСК отличаются статусом метилирования в области генов, не вовлеченных напрямую в поддержание плюрипотентности.

Нестабильность метилирования ДНК в ЭСК человека Lagarkova et al., 2006

–  –  –

Полногеномный анализ статуса метилирования 27000 CpG более 14000 генов (Methylation BeadChip) на базе Illumina.

Для двух линий чЭСК мы обнаружили различия в степени метилирования CpG в промоторах более 400 генов.

–  –  –

• ЭСК экспрессируют большое число генов на низком уровне (Carter et al., 2005)

• Многие гены ЭСК, независимо от их статуса экспрессии, содержат сайты, гиперчуствительные к ДНКазе I (Meshorer et al., 2006)

• Наличие в ЭСК большого количества маркеров транскрипционно-активного хроматина в ЭСК (H3K4me3, H4Ac и т.д.) (Azuara et al., 2006)

• Высокая активность реорганизации хроматина (Meshorer et al., 2006) Зачем нужны дифференцированные производные ЭСК?

Trounson A, 2006 «Идеальная» дифференцировка

- ЭСК должны культивироваться в стандартизованных условиях.

- Должны быть отработаны протоколы генетических манипуляций с ЭСК и технология клонального роста.

- Индуцированная дифференцировка должна приводить преимущественно к желаемому клеточному фенотипу и он должен быть закреплен.

- Должна существовать возможность селекции нужных популяций клеток.

- Протоколы дифференцировки должны быть воспроизводимы и контролируемы на каждом этапе. Действие факторов, участвующих в дифференцировке, должно быть хорошо известно и соответствовать состоянию in vivo

- Нежелательны многокомпонентные нестандартизованные факторы, такие как сыворотка, кондиционная среда, клеточные экстракты и т.д.

Поговорим о скучном. Зачем нужна стандартизация условий культивирования?

–  –  –

ЭСК разных линий, культивируемые в одинаковых условиях, морфологически не различаются Культивирование чЭСК Условия культивирования:

MEF, KO DMEM, Serum replacement, bFGF Пересев – через 5-7 дней.

Первые пассажи – механически.

Последующие мягким (0,02%) трипсином или 0.1% коллагеназой IV

–  –  –

Стоит от миллиона до полутора миллионов евро в зависимости от комплектации.....Выходные все-таки отменяются....

Для получения большого количества материала лучше использовать биореакторы

–  –  –

Firpo, 2006 www. nlm.nih.gov ЗАКЛЮЧЕНИЕ

• ЭСК – единственная приемлемая модель для изучения раннего эмбриогенеза человека и тканеспецифической дифференцировки.

• Исследования хромосомных аномалий в ЭСК и эпигенетических вариаций может дать новые знания о процессах поддержания плюрипотентности, дифференцировки и трансформации.

• Для того, чтобы результаты наших исследований были более правдивы и воспроизводимы, мы должны вырабатывать стратегии стандартизации получения, культивирования и дифференцировки ЭСК.

Ian Wilmut, commenting on reports of the first direct reprogramming of adult

human fibroblasts:

“No doubt publication of these results will lead to demands that no more stem cell lines be derived from human embryos, but they will be premature ……Extensive tests will then be required to confirm that the resulting cell lines are equivalent to those derived from embryos. In the meantime it is essential that research continues to improve procedures for derivation and maintenance of hESCs.”



Похожие работы:

«А. А. Синельникова 227 рецептов из хлебопечки для вашего здоровья Серия «Еда, которая лечит» http://www.litres.ru/pages/biblio_book/?art=10666857 Синельникова А. А. 227 рецептов из хлебопечки для вашего здоровья: Вектор; Санкт-Петербург; 2014 ISBN 978-5-9684-2201-9 Аннотация Хлебопечка стала одним из...»

«ФИЛОСОФИЯ ПОЛИТИКИ И ПОЛИТОЛОГИЯ УДК 327.82 + 327.83 + 316.653 Р. С. Мухаметов СПЕЦИФИКА ОБЩЕСТВЕННОЙ ДИПЛОМАТИИ КАК ИНСТРУМЕНТА ВНЕШНЕЙ ПОЛИТИКИ ГОСУДАРСТВА* В статье говорится о месте и роли неправительственных организаций в достижении внешнеполитических целей и...»

«Ксенофеминизм: Политики отчуждения Laboria Cuboniks НОЛЬ 0x00 Наш мир – головокружение. Это мир, кишащий технологическими проводниками, которые заряжают нашу повседневность абстракцией, виртуальностью и...»

«Цели обучения: Глава 6 Разработка инструментария После прочтения этой главы читатель сможет: понять свойства хороших вопросов 1. кратко описать процедуры тестирования и 2. проверки валидности вопросов об инвалидности «Масштаб мобильности» Крзистоф Кучик Фотография с конкурса ВОЗ “Образы здоровья и инвалидности 2003/2004” РАЗРАБОТКА ИН...»

«ISSN 0869-4362 Русский орнитологический журнал 2016, Том 25, Экспресс-выпуск 1296: 2085-2091 Динамика ареала белокрылой крачки Chlidonias leucopterus и изменения в её территориальном размещении в Восточном Казахстане в ХХ – начале XXI веков Н.Н.Березовиков, А.С.Фельдман Николай Николаевич Березовиков. Отдел орнит...»

«Пояснительная записка Данная рабочая программа разработана на основе государственного стандарта общего образования по предметам «Изобразительное искусство» и «Музыка», входящим в образовательную область «Искусство»,...»

«Аналитическая записка «Анализ государственного внутреннего долга Российской Федерации» Введение Целью работы является анализ состояния государственного внутреннего долга и эффективности использования гос...»

«Информация о деятельности Негосударственного образовательного учреждения дополнительного образования взрослых «Центр развития семейных форм устройства детей» (г.Мурманск) Негосударственного образовательного учреждения дополнит...»








 
2017 www.pdf.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - разные матриалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.