WWW.PDF.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Разные материалы
 

Pages:   || 2 | 3 |

«НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ В ПТИЦЕВОДСТВЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ, РАЗРАБОТАННОЙ НА ОСНОВЕ СЫРЬЕВЫХ ИСТОЧНИКОВ ПЧЕЛОВОДСТВА ...»

-- [ Страница 1 ] --

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Казанская государственная

академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана»

На правах рукописи

АХМЕТОВА ЛИЛИЯ ТИМЕРХАНОВНА

НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ

ПРИМЕНЕНИЯ В ПТИЦЕВОДСТВЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ,

РАЗРАБОТАННОЙ НА ОСНОВЕ СЫРЬЕВЫХ ИСТОЧНИКОВ

ПЧЕЛОВОДСТВА

06.02.05 - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза 06.02.03 – Ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

Научные консультанты д.вет.н., профессор Алимов А.М.

д.х.н., профессор Гармонов С.Ю.

Казань – 2015 Светлой памяти моего отца Ахметова Тимерхана Габдулловича посвящается

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………….. 9 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………….. 19

1.1. Современные аспекты ветеринарно-санитарной экспертизы и контроля качества кормов и продукции птицеводства………………... 19

1.2. Токсикологическая оценка кормовых добавок……………………. 32

1.3. Особенности стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и кормовых добавок………………………………………... 34



1.4. Значение макро- и микронутриентов в физиологобиохимических процессах живого организма…………………………. 40

1.5. Современные тенденции в кормлении сельскохозяйственной птицы ………………

1.6. Вторичные сырьевые ресурсы пчеловодства как источники макро- и микронутриентов ……………………………

1.7.Заключение по обзору литературы…………………………………. 61 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………………………. 64 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ…..…………………………… 64

2.1. Определение составов биологически акти

–  –  –

3.11. Экономическая эффективность использования результатов исследований…………………………………………………………….. 222 ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ….……………………….………………… 224 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ…………………………………... 245 СПИСОК СОКРАЩЕННЫХ ТЕРМИНОВ……………………………. 248 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………..………………………... 249 СПИСОК ИЛЛЮСТРИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА………………… 293 ПРИЛОЖЕНИЯ …………………………………………………………. 299 Приложение 1: Диплом лауреата Премии Правительства РФ………... 300 Приложение 2: Технические условия на субстанцию «Перга очищенная» (ТУ 9882-005-27848209-2006)…………………………….. 301 Приложение 3: Технические условия на субстанцию «Мерва»

(ТУ 988225-001-95430157-2007)……………………………………… 302 Приложение 4: Технические условия на кормовую добавку «Винивет» (ТУ 9296-002-95430157-2007)……………………………… 303 Приложение Фармакопейная статья предприятия «Перга 5:

субстанция» (ФСП 420220277304)……………………………………… 304 Приложение 6: Регистрационное удостоверение на субстанцию «Перга» (Р № 001738/01) …………………………………………… 305 Приложение 7: Сертификат соответствия на «Винивет»-корм дополнительный (№0104175)…………………………………………… 306 Приложение 8: Патент РФ на изобретение «Способ производства лекарственной субстанции – Перги и установка для осуществления способа» № 2140169 от 27.10.99 г………………………………………. 307 Приложение 9: Патент РФ на изобретение «Способ получения лечебно-профилактического препарата» № 2161977 от 20.01.01 г….. 308 Приложение 10: Патент РФ на изобретение «Способ получения лечебно-профилактического препарата» № 2161981 от 20.01.01 г….. 309 Приложение 11: Патент РФ на изобретение «Премикс на основе продуктов пчеловодства и способ его получения» № 23355919 от 20.10.08 г………………………………………………………………….. 310 Приложение 12: Патент РФ на изобретение «Акустическая сушилка»

№ 2366874 от 10.09.09 г. ……………………………………………….. 311 Приложение 13: Патент РФ на полезную модель «Линия по пререработке продуктов пчеловодства (варианты)» № 73590 от 27.05.08 г. ………………………………………………………………… 312 Приложение 14: Свидетельство РФ на полезную модель «Установка для осушки перги и перговой суши» № 9583 от 16.04.99 г. ………….. 313 Приложение 15: Свидетельство РФ на полезную модель «Система обеспечения технологическим воздухом установки для обработки перги и перговой суши» № 9584 от 16.04.99 г. ……………………….. 314 Приложение 16: Свидетельство РФ на полезную модель «Установка для обеззараживания перги и перговой суши» № 9735 от 16.05.95 г... 315 Приложение 17: Свидетельство РФ на полезную модель «Установки для сушки перговых гранул в псевдоожиженном слое» № 9736 от 16.05.99 г. ………………………………………………………………… 316 Приложение 18: Свидетельство РФ на полезную модель «Установка для конвективной сушки перговой суши» № 9737 от 16.05.99 г. ……. 317 Приложение 19: Свидетельство РФ на полезную модель «Установка для обеззараживания перговых гранул» № 10089 от 16.06.99 г. …….. 318 Приложение 20: Свидетельство РФ на полезную модель «Установка для извлечения перговых гранул» № 10090 от 16.06.99 г. …………… 319 Приложение 21: Акт внедрения линии по производству «Лекарственная субстанция «Перга» от 02.02.2006 г. ………………... 320 Приложение 22: Акт внедрения технологической линии по выпуску кормовой добавки «Винивет» от 28.12.11 г. …………………………... 321 Приложение 23: Временное наставление по применению «Винивет»

в птицеводстве от 01.04.03 г. …………………………………………… 322 Приложение 24: Акт производственных испытаний КД «Винивет» от 06.08.02 г. ………………………………………………………………. 323 Приложение 25: Акт внедрения кормовой добавки «Винивет» от 26.11.11 г. ………………………………………………………………… 325 Приложение 26: Справка Министерства сельского хозяйства Республики Татарстан о внедрении КД «Винивет» от 21.12.2012 г. … 326 Приложение 27: Акт внедрения кормовой добавки «Винивет» от 28.09.11 г. ……………………………………………………………….. 327 Приложение 28: Акт использования результатов НИР ………………. 329 Приложение 29: Карта обратной связи от 25.10.13 г. ………………… 330 Приложение 30: Диплом Академии наук Республики Татарстан за группу изобретений по выпуску кормовой добавки «Винивет» …….. 331 Приложение 31: Диплом Лауреата «Лучшие товары Республики Татарстан 2010 года» за кормовую добавку «Винивет» ……………… 332 Приложение 32: Письмо Департамента провинции Ниагара, 333 Онтарио, Канада…………………………………………………………..

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Отечественное птицеводство вносит существенный вклад в обеспечение населения высококачественной продукцией. В последние годы производство мяса птицы приблизилось к сорока процентам в мясном балансе потребления населением страны, а к 2020 году, согласно разработанной Министерством сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации Концепции развития птицеводства, вырастет до 4,5 миллиона тонн мяса и до 50 миллиардов штук яиц в год [107, 311].

Развитие и укрепление контроля за качеством и безопасностью продуктов питания является одним из приоритетных направлений государственной политики в области здорового питания населения РФ в соответствии с Доктриной продовольственной безопасности Российской Федерации (Указ Президента РФ от 30.01.2010 года №120) и Основ государственной политики Российской Федерации в области здорового питания населения на период до 2020 года (Распоряжение Правительства РФ от 25.10.2010 года №1873-р).

В настоящее время отмечается возрастающий спрос на качественную и экологически безопасную продукцию и тенденция по разработке продуктов нового поколения, отвечающих современным требованиям к питанию [256].

Ключевое значение приобретают вопросы качества и конкурентоспособности продукции отечественного производства. С этой целью разрабатываются новые направления, ставятся новые задачи перед ветеринарно-санитарной экспертизой, призванной осуществлять контроль как на наличие в продуктах полезных нутриентов и свойств, так и на загрязнение ксенобиотиками и т.д.

[78, 205, 272].

Степень разработанности проблемы. Анализ литературных источников показал, что качество конечной продукции птицеводства наряду с другими факторами определяет как состав кормов и кормовых добавок, используемых в рационах птицы, так и физиолого-биохимический статус птицы [132, 212].

В полноценном сбалансированном кормлении должны содержаться все необходимые энергетические, пластические, биологически активные вещества, призванные обеспечить здоровье птицы, ее высокую продуктивность, а в конечном итоге безопасность, качество и технологические свойства мяса и яиц [132, 311].





Наиболее эффективным считается использование макро- и микронутриентов природного происхождения [132, 188]. Так, в современных технологиях кормления используются пробиотические, пребиотические и антиоксидантные кормовые добавки; хелатные комплексы биогенных металлов; добавки с сорбирующими кремнийсодержащими минералами и т.д. [43, 120, 153, 165, 246, 285].

Однако, вопрос поиска новых источников для производства безопасных и эффективных кормовых добавок для птицы, способных оказывать положительное влияние не только на ее организм, но и опосредованно на здоровье человека при употреблении мясной и яичной продукции, остается актуальным. Ветеринарно-санитарный контроль качества кормовых добавок и сырья для их изготовления, является обязательной частью в комплексной оценке качества мяса птицы и яиц.

Анализ отечественной и зарубежной литературы показал, что одним из перспективных источников сырья для их получения являются возобновляемые маловостребованные продукты пчеловодства - перга и мерва, содержащие в своем составе обширный комплекс витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов [213, 288, 362, 370, 382, 387, 412, 434], вследствие чего могут являться естественными стимуляторами физиолого-биохимических процессов в организме птицы, способствуя улучшению вкусовых качеств и экологической чистоты конечной продукции птицеводства. Однако в настоящее время нет фундаментальных комплексных исследований по физиолого-биохимическому влиянию продуктов пчеловодства на организм птицы и по использованию их в качестве сырьевых источников для промышленного получения кормовых добавок.

Таким образом, одним из направлений современной биологической науки является поиск и оценка природных объектов, обладающих комплексными антитоксическими, антимутагенными, адаптогенными, антиоксидантными, иммуномодулирующими свойствами для получения и безопасного использования в кормлении сельскохозяйственной птицы кормовых добавок, способных улучшать физиолого-биохимический статус организма птицы и повышать качество продукции птицеводства.

В соответствии с вышеизложенным были определены цель и задачи настоящего исследования.

Цели и задачи. Целью работы явилось научное обоснование эффективности применения разработанной на основе маловостребованных продуктов пчеловодства кормовой добавки в кормлении сельскохозяйственной птицы для получения качественной продукции птицеводства.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести ветеринарно-санитарную оценку сырьевых источников пчеловодства –перги и мервы и разработанных на их основе биологически активных субстанций и кормовой добавки «Винивет».

2. Провести анализ биохимического, в том числе аминокислотного, витаминного и микроэлементного состава разработанных биологически активных субстанций и кормовой добавки «Винивет».

3. Определить генотоксические и антимутагенные эффекты биологически активной субстанции «Перга» в бактериальных тест-системах (тест Эймса, SOS-хромотест).

4. Провести комплекс токсикологических исследований кормовой добавки «Винивет» на лабораторных животных по определению острой неспецифической токсичности, ирритантного и кожно-резорбтивного эффектов, ульцерогенного, аллергизирующего действия, эмбриотоксических свойств.

5. Изучить физиолого-биохимическое действие разработанной кормовой добавки на состояние гемопоэза, иммунной системы, обмена веществ, функциональную активность печени, желудка.

6. Выяснить влияние кормовой добавки «Винивет» на зоотехнические показатели птицы в условиях птицеводческих хозяйств – сохранность, мясную и яичную продуктивность, переваримость, конверсию корма.

7. Провести ветеринарно-санитарную экспертизу качества яичной и мясной продукции для обоснования возможности использования кормовой добавки «Винивет» в птицеводстве.

Научная новизна работы.

Впервые разработаны способы переработки маловостребованных продуктов пчеловодства и получения биологически активных субстанций и кормовой добавки для птицеводства на их основе с учетом оценки сырьевого потенциала, экологии и ветеринарно-санитарных требований, предъявляемым к сырью.

Ветеринарно-санитарной оценкой качества целевых продуктов доказано, что разработанные способы переработки пчеловодческого сырья обеспечивают химическую и микробиологическую безопасность полученных субстанций и кормовой добавки с сохранением первоначальных состава и свойств сырья.

Впервые установлены в бактериальных тест-системах на штаммах Salmonella typhimurium ТА100 и Escherichia coli PQ37 десмутагенные, антимутагенные и биостимулирующие свойства разработанной кормовой добавки.

Изучено влияние кормовой добавки «Винивет» на организм лабораторных животных и показано, что она не токсична и не обладает местнораздражающим, аллергезирующим, эмбриотоксическим, тератогенным действием.

На основании комплексных биохимических исследований установлено, что разработанная кормовая добавка стимулирует физиолого-биохимические процессы в организме сельскохозяйственной птицы, активизирует функциональные возможности пищеварительной системы, улучшает обмен веществ и кроветворение, повышает иммунный статус цыплят-бройлеров, кур-несушек, индеек.

Впервые на основании объемных данных зоотехнических результатов, полученных в промышленных условиях, доказана эффективность использования в кормлении сельскохозяйственной птицы кормовой добавки из маловостребованных продуктов пчеловодства, которая оказывает положительное влияние на сохранность, рост и продуктивность птицы как яичного, так и мясного направления, на переваримость корма.

Результаты ветеринарно-санитарной экспертизы продукции птицеводства показали, что использование в кормлении птицы кормовой добавки «Винивет» позволяет получить экологически безопасные продукты, повысить качество мяса и яиц, их пищевую и биологическую ценность.

Научная новизна и приоритет разработок диссертации отражены в публикациях ведущих рецензируемых журналов, аккредитованных ВАК и защищены 13 охраноспособными документами Российской Федерации.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретически обоснована и научно доказана возможность использования продуктов пчеловодства – перги и мервы для получения биологически активных субстанций и кормовой добавки на их основе с целью безопасного и эффективного применения в кормлении сельскохозяйственной птицы с учетом ветеринарно-санитарных требований и норм, предъявляемым к природному сырью, кормам и кормовым добавкам.

По составу полученные целевые продукты представляют собой сбалансированные комплексы витаминов, макро- и микроэлементов, аминокислот, обладающие выраженным биологически активным эффектом, которые положительно влияют на физиолого-биохимические процессы в организме птицы.

Разработанная кормовая добавка относится к нетоксичным веществам и проявляет антимутагенные и десмутагенные свойства, что открывает очевидную перспективу ее использования для профилактики индуцированного мутагенеза у птицы в качестве антигенотоксических и генопротекторных препаратов.

Результаты проведенных исследований расширяют и углубляют знания о физиолого-биохимическом воздействии на организм животных инновационных биокомплексов, полученных на основе продуктов пчеловодства, и доказывают эффективность их использования в птицеводстве. Выявлено, что при их использовании повышается бактерицидная активность кожи, лизоцимная активность сыворотки крови, функциональная активность нейтрофилов, улучшается морфобиохимический состав крови кур и индеек по количественным показателям гемоглобина, общего белка, глюкозы, каротина, кальция и фосфора, что способствует улучшению обменных процессов и иммунной реактивности.

Применение разработанной кормовой добавки в промышленном птицеводстве способствует сохранности поголовья, увеличению среднесуточного прироста живой массы цыплят, ускорению начала яйцекладки, увеличению яйценоскости, повышению выхода яйцемассы при снижении затрат корма на один килограмм яйцемассы. Определены оптимальные среднесуточные дозы кормовой добавки «Винивет» в кормлении сельскохозяйственной птицы, способствующие достижению максимальных зоотехнических результатов.

Ветеринарно-санитарная экспертиза установила улучшение качества продукции птицеводства, повышение ее пищевой и биологической ценности при использовании в кормлении птицы разработанной кормовой добавки «Винивет».

Разработан комплект научно-технической документации на биологически активные субстанции и кормовую добавку «Винивет», в том числе фармакологическая статья ФСП 42-0220-2773-04 на «Лекарственную субстанцию «Перга», технические условия на субстанцию «Перга очищенная» (ТУ 9882-005-27848209-2006), субстанцию «Мерва» (ТУ 988225кормовую добавку «Винивет» (ТУ 9296-002-95430157инструкции по применению, промышленный и лабораторный регламенты производства биологически активных субстанций и кормовой добавки с учетом ветеринарно-санитарных требований, которые утверждены и зарегистрированы в установленном порядке.

Разработана методика одновременного определения 10 водорастворимых витаминов, а также жирорастворимых витаминов в сложных по составу природных объектах, в том числе в биокомплексах на основе продуктов пчеловодства.

Разработанные способы по переработке продуктов пчеловодства – перги и мервы и получению биокомплексов на их основе, внедренные на ЗАО РНПЦ «Семруг», ООО «АНТ» (Республика Татарстан), ООО «В-мин»

(Московская область), позволяют сохранить первоначальные состав и свойства сырья, а также обеспечить микробиологическую и химическую безопасность целевых продуктов.

КД «Винивет» используется в рационах кормов сельскохозяйственной птицы и внедрена на птицефабриках КФК «Юдинский», КФХ «Марс»

(Республика Татарстан), ФГУП ППЗ СГЦ «Смена» Россельхозакадемии (Московская область), на фермерских хозяйствах (Республика Татарстан и Чувашия).

Методология и методы исследования. В ходе выполнения диссертационной работы применяли физико-химические, биохимические, морфофизиологические, иммунологические, токсикологические, зоотехнические методы исследования. Для определения качества продукции птицеводства использовались органолептические, химические, микробиологические методы, применяемые в ветеринарно-санитарной экспертизе. Подробное описание методологии и методов проведенных исследований отражены в главе «Материалы и методы».

Положения, выносимые на защиту:

1. Ветеринарно-санитарная экспертиза маловостребованных продуктов пчеловодства - перги и мервы, их биохимический состав и оценка потенциала сырьевого рынка в Российской Федерации определяют возможность их использования для промышленного получения биологически активных субстанций и натуральной кормовой добавки для птицеводства.

Разработанные способы переработки сырьевых источников 2.

пчеловодства и ветеринарно-санитарный контроль позволяют обеспечить химическую и микробиологическую чистоту и сохранить весь комплекс водо- и жирорастворимых витаминов, аминокислот и микроэлементов в целевых продуктах.

3. Комплекс фармако-токсикологических исследований кормовой добавки «Винивет» выявил ее безвредность, определив, наряду с биологической ценностью, возможность ее использования в кормлении сельскохозяйственной птицы.

4. Разработанная кормовая добавка на основе продуктов пчеловодства оказывает выраженное положительное влияние на физиолого-биохимический статус организма птицы, а именно способствует активированию метаболических процессов, улучшает морфологический и биохимический состав крови, повышает естественную резистентность, гуморальный и клеточный иммунитет и обладает антимутагенными свойствами.

5. Применение кормовой добавки «Винивет» является эффективным в кормлении сельскохозяйственной птицы в промышленных условиях, позволяя улучшить зоотехнические результаты – сохранность, прирост живой массы, яйценоскость, конверсию корма и экономические показатели отрасли.

6. Ветеринарно-санитарная экспертиза продукции птицеводства установила, что использование в рационах сельскохозяйственной птицы кормовой добавки «Винивет» способствует улучшению качества мяса и яиц, повышает их пищевую и биологическую ценность.

Личный вклад автора состоит в выборе научного направления, постановке цели и задач исследований, выборе объектов и методов исследований, разработке способов переработки природных источников и получения новых целевых продуктов, проведении лабораторных и производственных испытаний, формулировании научных положений и выводов, систематизации и интерпретации полученных результатов.

Автором обосновано перспективное направление рационального использования вторичных природных ресурсов и отходов перерабатывающей промышленности; проведены испытания на птице в условиях лабораторий и птицеводческих хозяйств.

Исследование состава и некоторых биохимических свойств кормовой добавки проводилось совместно с аспирантом кафедры аналитической химии, сертификации и менеджмента качества ФГБОУ ВПО «Казанский национальный исследовательский технологический университет» Зеваковым И.В. (научный руководитель: к.х.н. Ахметова Л.Т.), а также с к.б.н.

Фатыховой Д.Г. Изучение влияния кормовой добавки «Винивет» на зоотехнические параметры птицы проводилось совместно с ведущим научным сотрудником ВНИТИП, д.с-х.н. Андриановой Е.Н., а также с к.вет.н. Маковецкой Л.Н. Забор крови и биохимические анализы проводились совместно с сотрудниками Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана.

Степень достоверности и апробация результатов. Статистическая обработка результатов проводилась в стандартной компьютерной программе Microsoft Excel. Результаты считались достоверными при Р0,05 по критерию Стьюдента.

Основные результаты диссертации доложены на Всероссийских и Международных научных конференциях, симпозиумах и Конгрессах (Kazan, 2009, 2011; Воронеж, 2010; Санкт-Петербург, 2010; Москва, 2004, 2009, 2010, 2012; Czech Republic, Praha, 2004, 2010, 2012; Germany, Berlin, 2011; Taiwan, Taipei, 2011; Argentina, Buenos-Aires, 2011; Украина, Алушта, 2012).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 52 печатных работы, в том числе 22 статьи в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 13 патентов Российской Федерации на изобретения и полезные модели, 1 методические рекомендации, 16 публикаций по материалам конференций.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 333 страницах и включает в себя следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, заключение и выводы, список использованной литературы, включающий 468 источников, в том числе 117 иностранных, и приложения.

Диссертация иллюстрирована 63 таблицами, 31 рисунком. Прилагаются документы, подтверждающие научно-практическую значимость работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные аспекты ветеринарно-санитарной экспертизы и контроля качества кормов и продукции птицеводства Ветеринарно-санитарная экспертиза является отраслью науки, изучающей методы санитарно-гигиенического исследования пищевых (мясо, молоко, рыба, яйца) и сырьевых продуктов животного происхождения, а также устанавливающей научно обоснованную ветеринарно-санитарную оценку этих продуктов. Основной задачей отрасли является предотвращение переноса заразных заболеваний с инфицированных продуктов (сырья) на здоровых животных, а также предупреждение возможного заражения людей (через продукты, полученные от больных животных) заболеваниями, общими для животных и человека - антропозоонозами, такими как сибирская язва, туберкулез, бруцеллез, трихинеллез и другие [77].

От исходных компонентов кормов, от их состава зависит качество продукции животного происхождения, поэтому к классической ветеринарногигиенической деятельности относится также изучение и оценка кормов и технологий их переработки. При этом необходимо не только оценивать калорийность, содержание протеина, сырой клетчатки, кальция и фосфора в кормах, но и разрабатывать дифференцированные анализы содержания в них аминокислот, витаминов, и микроэлементов. С точки зрения микробиологии и токсикологии недоброкачественный корм может вызвать серьезные заболевания и отход животных, вследствие чего важно осуществлять бактериологический и ветеринарно-токсикологический контроль кормов и кормовых добавок, что является важным этапом в комплексной оценке животноводческих продуктов [52].

В ветеринарно-санитарной экспертизе используются методы патологоанатомических, биохимических, микробиологических, зоогигиенических и эпитологических исследований [147].

Перевод птицеводства на промышленную основу, создание птицеводческих комплексов и агропромышленных объединений, где постоянно растет производство продуктов птицеводства на базе новых технологий и при использовании нетрадиционных кормов, ставят новые научные задачи в области ветеринарно-санитарной экспертизы. При этом решение многих научных проблем в данной области тесно связано с проблемами экологии и охраны окружающей среды [211].

1.1.1. Ветеринарно-санитарная экспертиза продукции птицеводства Развитие и укрепление контроля за качеством и безопасностью продуктов питания является одним их приоритетных направлений современной науки о питании [304], а также государственной политики в области здорового питания населения РФ. В развитие этого направления Указом Президента Российской Федерации от 30 января 2010 года №120 утверждена Доктрина продовольственной безопасности Российской Федерации, Распоряжением Правительства РФ от 25 октября 2010 года №1873-р утверждены «Основы государственной политики Российской Федерации в области здорового питания населения на период до 2020 года».

В последние годы прослеживается устойчивая тенденция спроса на продукты питания высокого качества. При производстве продуктов питания необходимо соблюдать соответствие продуктов потребностям организма в пищевых веществах, энергии, витаминах, а также экологическую безопасность продуктов [10], что является важной социальной задачей.

Необходимым условием создания качественной мясной продукции является соблюдение ветеринарно-санитарных принципов выращивания животных, в том числе птицы.

Актуальность ветеринарно-экологических проблем создания оптимальной среды для птицы вытекает из специфики промышленной технологии, имеющейся в современном птицеводстве:

высокая концентрация, высокая продуктивность, сочетание с дифференцированными требованиями к качеству мяса. Современная производственная среда выращивания сельскохозяйственной птицы включает антропогенные изменения биотических и абиотических экологических факторов для получения качественной и рентабельной продукции [52].

В составе мяса птицы присутствуют вода, белки, жир, минеральные вещества, которые представлены соединениями калия, натрия, кальция, фосфора, магния, железа и меди. Содержатся также экстрактивные вещества и гликоген [11]. В мясе кур и индеек содержится больше белков и меньше жира, чем в мясе уток и гусей. Мясо любой птицы характеризуется повышенным содержанием белков, при этом в нем больше полноценных белков, что и придает ему высокую питательную ценность [303].

В морфологическом отношении мясо представляет собой сложный тканевой комплекс, в состав которого входит мышечная ткань вместе с соединительно-тканными образованиями, жиром и костями. Количественное соотношение основных тканей, входящих в состав мяса, зависит от вида, породы, упитанности, пола, возраста птицы, кормового рациона [175].

Для мышечной ткани характерны мелкозернистость и большая плотность; при этом наиболее развитыми являются грудные мышцы; их масса равна или больше, чем масса других мышц. В «белом мясе»

содержится больше воды и белка, много аминокислот, особенно аргинина и лизина, меньше жира; в «красном мясе» почти в два раза больше витаминовтиамина, пантотеновой кислоты, рибофлавина. Мясо птицы содержит также другие аминокислоты, среди которых - гистидин, тирозин, триптофан, цистин, глютаминовая кислота [106].

В мышечной ткани у птицы меньше соединительной ткани по сравнению с крупными животными, соответственно меньше эластина и коллагена –неполноценных белков и напротив больше полноценных, легкоусвояемых белков. Процентное отношение неполноценных белков к полноценным в мясе птиц составляет около 7% (в говядине - 15-20%).

Наряду с этим белковые компоненты соединительной ткани мяса птиц легко образуют растворимые продукты при кулинарной обработке [60].

На химический и морфологический состав мяса птицы влияют ее упитанность, возраст, порода, пол, кормовой рацион и технология выращивания. Так, в процессе роста птицы прирост мышечной ткани до определенного возраста происходит значительно интенсивней, чем костной.

Затем этот рост замедляется, повышается содержание жира и уменьшается количество влаги. Меняются структурно-механические и физико-химические свойства, а также органолептические показатели. Присутствие в мясе птиц 0,9-1,2% экстрактивных веществ придает ему особые вкусовые свойства и вызывает усиленное выделение пищеварительных соков, что способствует лучшему усвоению пищи. Особенно диетическим является мясо кур и индеек. При этом мясо самок нежнее и вкуснее, чем мясо самцов, достигших половой зрелости. Степень упитанности птицы также влияет на выход мяса, его тканевый и химический состав, пищевую и энергетическую ценность.

Содержание съедобных частей зависит от вида птицы и категории упитанности - чем выше категория, тем больше выход мяса [142, 178].

Жировая ткань представляет собой одну из разновидностей рыхлой соединительной ткани; второй после мышц морфологический компонент, определяющий качество мяса. Клетки в соединительной ткани заполнены капельками жира, который откладывается под кожей на животе, спине, груди, а также на жедудке и кишечнике. Окраску жира птиц обеспечивают каротин и ксантофилл.

Жиры содержат непредельные жирные кислоты, жирорастворимые витамины и другие липоидные соединения, которые не синтезируются в организме человека, но играют важную роль в физиологических и обменных процессах организма, чем и обусловлена их биологическая ценность.

Жир птиц относится к группе твердых жиров. В их состав входят триглицериды стеариновой, пальмитиновой и олеиновой жирных кислот. Изза высокого содержания последней, жир птиц имеет низкую температуру плавления: для кур она составляет 23-40°С; для уток и индеек - 31-32°С, вследствие чего усваивается легче, чем жир других домашних животных.

Усвояемость его организмом человека составляет примерно 93%, но жир этот подвержен быстрому окислению. Поэтому при определении свежести мяса этот фактор должен учитываться. В составе жира птицы -кур и гусей находятся еще миристиновая, линолевая и лауриновая кислоты. Содержание летучих жирных кислот в жире птицы менее 0,1-0,2%. Кислотное число подкожного жира кур ниже, чем внутреннего и составляет, соответственно, 0,50 и 0,60 [303].

Общее количество жира в мясе тушки взрослой птицы доходит до 20% (таблица 1).

–  –  –

Вода в мышечной ткани находится как в свободном, так и связанном состояниях; содержание ее в тушках различной упитанности может колебаться в пределах 47-78%. Чем жирнее мясо, тем меньше в нем воды, поскольку основным носителем воды в мясе являются белки [146].

Согласно ГОСТ 15467-79 качество продукции определяют как совокупность свойств продукции, обуславливающих ее пригодность удовлетворять определенным потребностям в соответствии с ее назначением [22].

Показатели качества мяса зависят от состава и свойств исходного сырья, т.е. кормов, используемых рецептур, соблюдения условий и режимов технологического производства и хранения, санитарно-гигиенических норм, контроля за дозировкой химических добавок.

Для оценки качества мяса птицы необходимо знать его биологическую ценность, характеризующую результат взаимодействия продукта и организма. Биологическая ценность в свою очередь зависит от сбалансированности содержащихся аминокислот, качества белков, а также уровня их гидролиза пищеварительными ферментами. Составляющими биологической ценности являются безвредность и питательность, а также биологическая активность и органолептические свойства продуктов птицеводства. Безвредность характеризует отсутствие специфической и неспецифической токсичности, что важно для охраны организма птицы от контаминирующего влияния посторонних веществ корма, а также различных стимуляторов гормональной и негормональной природы, кормовых средств биологического и химического синтеза и антибиотиков [230].

Пищевая ценность определяется химическим составом мяса. Согласно современным представлениям понятие «пищевая ценность» отражает всю полноту полезных свойств продукта, включая такие определения как «биологическая ценность» (качество белка), «энергетическая ценность»

(количество энергии, высвобождающейся в организме из пищевого продукта) и др. [256].

Пищевая ценность мяса зависит от количественного соотношения воды, белка и жира; содержания незаменимых аминокислот, полиненасыщенных жирных кислот, а также витаминов и микроэлементов [231].

Белки являются основной частью органических веществ мышечной ткани и составляют ее главную пищевую ценность. Они могут отличаться друг от друга по строению, свойствам и функциям. Так, белки цитоплазмы, относящиеся к классу альбуминов и глобулинов, составляют 90% от белков мышечной ткани и в пищевом отношении являются полноценными, так как в своем составе содержат все незаменимые аминокислоты (аргинин, лейцин, гистидин, изолейцин, лизин, метионин, треонин, триптофан, фенилаланин).

Содержание миофибриллов составляет около 60%, в их составе до 40% занимает миозин и 12-15%-актин. Актомиозин - комплекс актина и миозина, так же как и тропомиозин, содержание которого колеблется от 2,5 до 5%, участвуют в сокращении мышечного волокна. Все они по своему составу и свойствам относятся к классу глобулинов.

Примерно треть от общего содержания белков мышечной ткани приходится на белки саркоплазмы, в числе которых миоген, имеющий среднее положение между альбуминами и глобулинами, занимает около 10%, а миоальбумин - типичный альбумин, примерно 1-2%. Оба они выполняют ферментативные функции.

Содержание миоглобина составляет до 1% от общего количества белков. Способен присоединять молекулы различных газов, с чем связана его физиологическая функция носителя кислорода. Содержит пигментную группу «гем», придающую красный цвет мышечной ткани. Относится к классу альбуминов, также как и белки клеточных ядер – нуклеопротеиды, содержащие фосфор, на чью долю приходятся десятые доли процента от общего содержания белков. Коллаген и эластин, которые относят к неполноценным белкам, представляют белки сарколеммы и составляют около 10% от всех белков мышечной ткани [10].

О пищевой ценности мяса судят по так называемому «качественному белковому показателю», который представляет собой отношение содержания триптофана (как индекса полноценных белков мышечной ткани) к оксипролину (показателю неполноценных соединительнотканных белков).

Качество мяса характеризуют также по соотношению: вода — белок, жир — белок, вода — жир. Между содержанием влаги и жира существует обратная корреляционная зависимость [143].

В комплекс показателей, определяющих пищевую ценность мяса, входят органолептические показатели: внешний вид, цвет, вкус, запах, консистенция, сочность, состояние жира, костного мозга, сухожилий и качество бульона при пробе варкой (ГОСТ 7702.0-74. Мясо птицы. Методы отбора образцов. Органолептические методы оценки качества). Цвет мяса зависит от концентрации миоглобина в мышечной ткани и состояния белковой части макромолекулы – глобина [146].

Важным качественным свойством мяса является консистенция, определяющая его нежность и сочность. Она зависит от содержания внутримышечного жира, размера мышц и диаметра мышечных волокон, степени гидратации белков, ассоциации миозина и актина и уровня деструкции мышечных белков, а также количества соединительной ткани, причем не только от общего ее содержания, но и соотношения в ней коллагена и эластина [144].

Запах и вкус мяса определяют экстрактивные вещества, их качественный и количественный состав, наличие летучих компонентов и преобразования, возникающие в ходе тепловой обработки. Среди веществ, которые придают вкусоароматические характеристики мясу – некоторые аминокислоты - глютатион, карнозин, ансерин, глютаминовая кислота, треонин, серосодержащие аминокислоты, углеводы, жиры, креатинин, креатин, а также летучие компоненты (карбонильные, серо- и азотсодержащие соединения, жирные кислоты и др.) [256].

Для определения свежести мяса используются различные методы.

Большое значение придается органолептическому методу. Исследовать мясо лучше при естественном освещении. Осматривают состояние поверхностного слоя мяса, его цвет, наличие или отсутствие корочки подсыхания; отмечают, имеются ли сгустки крови, загрязненность, плесень и личинки мух.

Устанавливают также внешний вид и цвет мышечной ткани в глубоких ее слоях. По методам отбора образцов и органолептического исследования мяса утвержден ГОСТ 7269-79. Для более точной санитарно-гигиенической оценки мяса используют также микробиологические, гистологические, химические и физико-химические методы [11].

К микробиологическим методам относят бактериоскопию мазковотпечатков, количественный учет микробов в пересчете на 1 г мяса, проведение редуктазной пробы, определение активности фермента каталазы, продуцируемого микроорганизмами.

Гистологический метод анализа по ГОСТ 19496-74 (по В. А.

Адуцкевичу) учитывает изменения микроструктурных показателей в мышечных волокнах, поскольку в свежем мясе четко выражена структура ядер мышечных волокон, а сами волокна сохраняют поперечную и продольную исчерченность. Если мясо сомнительной свежести - ядра мышечных волокон находятся в состоянии распада или лизиса. По мере порчи мяса с лизисом ядер исчезает и исчерченность мышечных волокон.

Гистологический метод определяет не только свежесть мяса, но и степень его созревания, а также пригодность к хранению и транспортировке [303].

ГОСТ 23392-78 «Мясо. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса» дает качественную оценку, включая метод определения летучих жирных кислот, метод определения продуктов распада белков в бульоне (реакция с 5%-ным раствором сернокислой меди) и метод микроскопического анализа (микроскопия мазков-отпечатков).

Для упрощенного биохимического исследования степени свежести мяса применяют «Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов», включающие в себя реакцию с сернокислой медью, реакцию на пероксидазу, реакцию с нейтральным формалином и определение амино-аммиачного азота (по А. М. Софронову).

Согласно полученных органолептическим методом данных, а также лабораторных показателей мясо подразделяют на свежее, подозрительной свежести и несвежее. Мясо подозрительной свежести считается условно годным, оно не подлежит свободной реализации, а в целях использования на пищевые цели для него устанавливают пути промышленной переработки.

Мясо несвежее на пищевые цели не используется [60, 231].

С помощью качественных химических и физико-химических методов можно выявить промежуточные или конечные продукты распада составных частей мяса (реакция с 5%-ным раствором медного купороса в бульоне, реакции на отдельные аминокислоты, на аммиак, сероводород и др.). Более точные количественные методы позволяют определить содержание аминоаммиачного азота, летучих жирных кислот, свободных аминокислот, величины рН мяса и др. [11].

Величина рН мяса - важный показатель его качества с точки зрения его переработки и хранения. pH белого и красного мяса птицы составляет 6,12 и 6,27 соответственно. Концентрация ионов водорода в мышечной ткани определяет ВСС - влагосвязывающую способность мяса, от которой зависит выход продукта, потеря массы при хранении и устойчивость продукта к развитию гнилостной микрофлоры. рН мяса наряду с другими показателями используется для выяснения направлений переработки мяса [175].

Водородный показатель определяют колориметрическим (индикаторным) методом, который используют для установления приближенного значения рН с погрешностью 1,0-0,5, либо количественным потенциометрическим методом.

Биохимические изменения в мясе птиц изучены недостаточно, нет единого мнения о значении и сроках его созревания. Однако, установлено, что процесс созревания оказывает положительное влияние на качество мяса.

По различным данным процесс созревания мяса птицы оканчивается примерно через 20 часов при 15°С и через 90 часов при 0°С, либо через 7 суток при 2-4°С. В мясе цыплят 7-суточного созревания pH равен 6,11, а в вареном виде оно обладает большей сочностью и нежностью, чем мясо суточного созревания - pH 5,69 [10].

Значение мяса и мясопродуктов в питании населения определяется тем, что они являются источниками незаменимых аминокислот, жира, минеральных и экстрактивных веществ, витаминов, потребление которых является необходимым для нормального функционирования организма.

Согласно прогнозам комиссии ФАО-ВОЗ и Организации экономического сотрудничества и развития - ОЭСР к 2021 году производство мяса птицы в России должно вырасти на 29%, до 4,133 миллионов тонн в год.

Прогнозируемые цифры подтверждаются данными разработанной на период до 2020 года Министерством сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации Концепции развития птицеводства, в которой предусмотрено увеличение продукции до 4,5 миллиона тонн мяса и до 50 миллиардов штук яиц в год [107].

Наращивание темпов производства и объемов выпуска продукции мясной промышленности требует совершенствования существующих и разработки новых технологических процессов, обеспечивающих рациональное использование сырьевых ресурсов, повышение выходов и улучшение качества выпускаемой продукции. Решение этих задач неразрывно связано с созданием систем объективной и надежной оценки показателей качества сырья и готовой продукции. Важная роль в повышении качества продукции животноводства и получении доброкачественных, безвредных для человека пищевых продуктов принадлежит ветеринарносанитарной экспертизе [146].

Ветеринарно-санитарный контроль качества кормов в 1.1.2.

птицеводстве Меры по совершенствованию норм кормления, сбалансированию рационов, разработке новых кормовых добавок, способных оказывать положительное влияние не только на организм птицы, но и опосредованно на здоровье человека при употреблении мясной и яичной продукции согласуются с «Концепцией государственной политики в области здорового питания населения РФ».

Кормовые добавки нового поколения должны обладать свойствами, обеспечивающими биологическую активность, безвредность и биодоступность, повышать физиолого-биохимический статус животных, что приводит к конечной цели - увеличению выхода мяса и повышению его потребительских свойств с сохранением ветеринарно-санитарной безопасности [12].

К классической ветеринарно-гигиенической деятельности относится оценка и изучение кормов, а также технологий их получения. Рационы кормов должны оцениваться не только в отношении калорийности, содержания сырой клетчатки, кальция и фосфора, перевариваемого протеина, но и витаминов, микроэлементов и аминокислот, поскольку от исходного состава кормов зависит качество продукции животного происхождения.

В случае невозможности идентификации кормов кроме органолептического исследования на прогоркание, заплесневение или разложение бактериального происхождения, проводят экспертизу на загрязнение кормов химическими веществами и патогенными микроорганизмами. Например, ветеринарно-санитарные проблемы могут быть связаны с кормлением птицы кормами, полученными от химизированного растениеводства, в связи с чем продукты животного происхождения могут прямо или косвенно угрожать здоровью человека.

Вред в этом случае развивается скрыто и проявляется в виде хронических токсикозов. К химическим веществам, загрязняющим корма, относятся фосфор- и хлорорганические соединения, пестициды, инсектициды, соли тяжелых металлов, а также бор, молибден и фтор. Так, может происходить хроническое отравление фтором при скармливании костной и мясо-костной муки или ртутью в результате скармливания загрязненной рыбной мукой, где ртуть содержится в небольших количествах. Возможно также загрязнение кормовых растений оловом и радиоактивными веществами [52].

Кроме того, необходимым является микробиологический контроль кормов и кормовых добавок, поскольку часто наблюдается обсеменение их сапрофитной флорой. Такие бактерии встречаются в почве и в окружающей среде, вследствие чего могут попадать в кормосмеси с зерновыми или с кормовыми добавками. В связи с этим в комплекс санитарно-гигиенических мероприятий включают определение микотоксинов грибов и токсинов бактерий, поскольку они могут накапливаться в организме и вызывать заболевания животных. Среди микотоксикозов наибольший ущерб наносят аспергиллотоксикозы, фузариотоксикозы и стахиботриотоксикозы [177].

Таким образом, ветеринарно-гигиеническая оценка продуктов животного происхождения и ветеринарно-токсикологический контроль кормов и кормовых добавок является важным этапом в комплексной оценке качества животноводческой продукции. Вследствие чего необходима процедура получения разрешительных документов на корма и кормовые добавки, а также препараты для ветеринарии, одним из этапов которой является их токсикологическая оценка с целью обеспечения их безопасного использования в птицеводстве.

1.2. Токсикологическая оценка кормовых добавок В двадцатом столетии в связи с резким скачком научно-технического прогресса практически во всех сферах человеческой деятельности стали широко применяться химические вещества, из-за чего возникла насущная потребность решения проблемы токсического влияния этих веществ на природу и живые организмы [30, 207].

Обеспечение химической безопасности, предотвращение вредного влияния потенциально опасных химических веществ на здоровье людей являются одними из основных задач, определенными ВОЗ в разработанной «Программе развития человечества в ХХI веке» [275]. В основе исследований лежит концепция гигиенического регламентирования вредных факторов окружающей среды, включающая установление количественных значений предельно допустимых концентраций, безопасных уровней воздействия вредных веществ в окружающей среде, максимально допустимых уровней химических средств защиты растений и остаточных количеств химических веществ в продуктах питания. Практическими результатами такой работы являются разработка рекомендаций и проведение правовых, технологических, медицинских, а также санитарно-гигиенического контроля за уровнем загрязнений [227].

Методы определения токсичности подробно изложены в издании Всемирной организации здравоохранения «Принципы и методы оценки токсичности химических веществ»; в работах [42, 65, 72, 73, 115, 279, 321 и др.].

В настоящее время существуют разнообразные методы определения острой, подострой и хронической токсичности, отличающиеся по дозе и продолжительности воздействия химического вещества. Острую токсичность определяют как вредное действие, проявляющееся за короткое время после введения разовой дозы, либо как вредное действие многократных доз, вводимых в течение суток [321].

При определении острой токсичности вычисляют среднюю летальную дозу, как «статически полученное выражение разовой дозы вещества, которая вызывает гибель 50% животных» [152]. Ее значение определяется расчетным путем.

При развитии острой интоксикации регистрируют сроки отравления и гибели животного; в случае выживания - скорость восстановления функций его организма [115]. В случаях, когда вещество не обладает выраженной токсичностью, для получения данных о верхних параметрах токсичности ежедневно вводят максимально возможную дозу, определяя суммарное количество введенного яда и фиксируя сроки гибели животного.

Исследуемые вещества вводят экспериментальным животным до кормления, натощак в ротовую полость или в желудок через зонд.

Среднесмертельная доза вычисляется статистическими методами, такими как методы Беренса, Шлоссера и др. [279]. Яды могут оказывать немедленное действие и иметь отдаленные последствия и вызывать в организме патологические изменения.

Оценивая экологическую опасность химических веществ, дополнительно к нормативам концентраций, применяют оценку особенностей поведения и свойств веществ (токсичность, мутагенность, канцерогенность и т.д.) С этой целью разработаны различные классификации, включенные в список нормативных документов.

Гигиеническая классификация взяла за основу количественную оценку токсической опасности химических веществ посредством экспериментально определенных предельно-допустимых концентраций. По гигиенической классификации токсические вещества по степени токсичности делятся на чрезвычайно токсичные, высокотоксичные, умеренно токсичные и малотоксичные; по степени опасности для теплокровных животных на особо опасные, опасные, умеренно опасные и малоопасные [65].

Для сохранения здоровья птицы, обеспечения ее максимальной продуктивности и высокого качества продукции необходимо полноценное кормление. Разработаны нормативы потребности в питательных веществах с учетом вида, возраста, физиологических особенностей птицы, включающие использование кормовых добавок и премиксов. В настоящее время активно идет поиск новых источников для обогащения рационов птиц полноценными микронутриентами. Но все новые источники биологически активных субстанций для производства кормовых добавок в обязательном и установленном порядке должны проходить токсикологическую оценку по показателям безвредности и эффективности.

Особенности стандартизации и сертификации ветеринарных 1.3.

препаратов и кормовых добавок Обеспечение надлежащего контроля качества ветеринарных препаратов и кормовых добавок (КД) оказалось возможным благодаря дополнительным мерам государственного регулирования: созданию системы аттестации производств, регистрации и сертификации ветеринарных препаратов и КД.

Государственной регистрации подлежат: новые лекарственные средства (ЛС) для животных; новые кормовые добавки; новые комбинации зарегистрированных ранее ЛС; новые комбинации зарегистрированных ранее добавок; ЛС, зарегистрированные ранее, но произведенные в других лекарственных формах, или с новой дозировкой, или с другим составом вспомогательных веществ; КД, зарегистрированные ранее, но произведенные в других формах, или с новой дозировкой, или с другим составом вспомогательных веществ; воспроизведенные ЛС; воспроизведенные КД.

Государственную регистрацию ЛС и КД проводит Россельхознадзор на основании заключения Федерального государственного учреждения "Всероссийский государственный Центр контроля качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ "ВГНКИ") в течение шести месяцев со дня подачи регистрационных документов и данных:

заявление о государственной регистрации ЛС или КД; названия; инструкцию по применению; сертификат качества; документы, подтверждающие регистрацию; результаты ветеринарных исследований; данные о производстве ЛС или КД; методы контроля качества. На основании рассмотрения материалов на препарат и заключения ВГНКИ, Россельхознадзор принимает решение о возможности зарегистрировать препарат, провести его широкие производственные и регистрационные испытания или отказать в регистрации по объективным причинам. На основании решения о регистрации Россельхознадзор выдает документ установленного образца о государственной регистрации на каждую форму ЛС или КД сроком на 5 лет, утвержденную инструкцию по применению ЛС или КД и согласованную нормативно-техническую документацию.

Минсельхоз России вносит добавку в госреестр лекарственных средств для животных и кормовых добавок [262].

КД производят в соответствии со стандартами, в которых устанавливаются характеристики продукции, правила осуществления и характеристики процессов разработки, производства, применения, хранения, перевозки, реализации и утилизации, а также правила и методы исследований (испытаний) и измерений, правила отбора образцов, требования к терминологии, символике, упаковке, маркировке или этикеткам и правилам их нанесения.

Стандартизация в ветеринарной области включает:

разработку ГОСТ и ТУ на корма, КД и премиксы; утверждение методов приготовления и контроля качества; рассмотрение стандартов на растительное сырье, химические реактивы; установление сроков годности, условий хранения, вида упаковки и др. Нормирование, стандартизация и сертификация продукции должны соответствовать международным требованиям по безопасности и качеству. Для эффективной реализации этих задач необходимо государственное регулирование. ФЗ «О техническом регулировании» установил обязательные требования к продукции, процессам производства, эксплуатации, хранению, перевозке, реализации и утилизации, выполнению работ и оказанию услуг, оценки и подтверждения соответствия качества продукции. Согласно закона, стандартизация должна проводиться на основе технического регламентирования продукции и процессов производства, что является условием предотвращения угрозы национальной безопасности [75]. Предусмотрена разработка технических регламентов, устанавливающих обязательные для исполнения требования, в частности технический регламент «Требования к безопасности кормов и кормовых добавок».

Основными нормативными документами, определяющими качество кормов в РФ являются ФЗ № 4979-1 «О ветеринарии», «Правила сертификации кормов и кормовых добавок на соответствие требованиям безопасности» [263] и Постановление Государственного Комитета РФ по Стандартизации и Метрологии от 18.06.2002 «О внесении изменений в Правила сертификации кормов и кормовых добавок». На федеральном уровне действует также более 50 нормативных документов, в которых содержатся нормы, так или иначе затрагивающие отношения, связанные с кормами и КД.

Сертификация кормов осуществляется в соответствии с нормативными документами, устанавливающими обязательные требования, направленные на предупреждение болезней животных, выпуск полноценных и безопасных в ветеринарном отношении продуктов животноводства и защиту населения от болезней, общих для человека и животных.

Корма, подлежащие обязательной сертификации, подразделены на 4 группы однородной продукции: корма растительного происхождения;

комбикорма, кормовые смеси, белково - витаминные добавки, премиксы, минеральное сырье; корма животного происхождения; корма микробиологического синтеза. При необходимости учета особенностей производства, назначения или иных признаков группы однородной продукции, их классифицируют на подгруппы или конкретные виды кормов.

Сертификацию кормов в соответствии с настоящими правилами организует и проводит орган по сертификации (ОС). Работу проводят эксперты ОС или привлеченные эксперты, имеющие подготовку и опыт работы в области оценки качества и сертификации из организаций, аттестованных на право проведения работ по сертификации кормов.

Корма, относящиеся к продукции с гарантированным сроком годности более 30 суток, могут быть сертифицированы по правилам, основанным на схемах по квалификации Международной Организации по Стандартизации (ИСО), корма сроком годности менее 30 суток - по сокращенной процедуре сертификации (таблица 2).

При наличии сертификатов соответствия на используемое сырье для комбикормовых заводов или других крупных организаций, имеющих стабильную технологию производства, предпочтительной является схема сертификации 3а или 5. Схемы сертификации 2, 2а и 4, 4а рекомендуются для организаций, реализующих корма у продавца по месту расположения организаций. Для хозяйств с небольшим объемом выпускаемых кормов предпочтительной является схема сертификации 7.

Сертификация отечественных и импортируемых кормов производится по одним и тем же правилам. Перечень показателей, подлежащих подтверждению при сертификации кормов, нормативы, а также методы испытаний устанавливают Госстандарт и Департамент ветеринарии Минсельхозпрода России.

Таблица 2 - Схемы, применяемые при сертификации кормов

–  –  –

Порядок проведения сертификации кормов включает: подачу и рассмотрение заявки; принятие решения по заявке; выбор схемы сертификации; определение количества и порядка отбора образцов (проб) кормов, подлежащих испытаниям; проведение идентификации; определение аккредитованной испытательной лаборатории (ИЛ), которая будет проводить испытания; проведение испытаний; анализ полученных результатов и принятие решения о выдаче или отказе в выдаче сертификата соответствия;

выдачу сертификата соответствия; осуществление инспекционного контроля.

Заявку на сертификацию заявитель - изготовитель кормов направляет в любой орган по сертификации, который рассматривает заявку и принимает по ней решение, направляемое заявителю. Выбор схемы сертификации кормов осуществляет ОС по согласованию с заявителем. Корма могут быть сертифицированы по одной из приведенных выше схем ИСО 2 - 5 и 7, а также дополнительным схемам 2а, 3а, 4а.

Отбор образцов (проб) для испытаний проводят представители ОС или по их поручению уполномоченная ими другая организация (территориальный орган Госстандарта России, аккредитованные испытательные лаборатории).

Объем выборки и порядок отбора образцов определен в нормативной документации (НД) на корма и методах испытаний. После отбора образцов составляется акт отбора. Образцы опечатываются печатью ОС, транспортируются в аккредитованную испытательную лабораторию и хранятся там до окончания работ по сертификации кормов и срока действия сертификата.

Идентификация кормов на соответствие их наименованию осуществляется ОС по органолептическим показателям, характеризующим основные потребительские свойства и регламентированным в соответствующей НД после отбора образцов. При необходимости проводятся дополнительные исследования по физико-химическим показателям. При отрицательных результатах идентификации корма не подлежат сертификации на соответствие требованиям безвредности (безопасности).

Отказ в выдаче сертификата по результатам идентификации оформляется решением ОС.

Отобранный образец (проба) делится на две части - одна подвергается анализу, другая, после выдачи сертификата соответствия, хранится в испытательной лаборатории (ИЛ), центре (ИЦ) не более срока годности.

Испытание образцов (проб) проводят аккредитованные ИЛ или ИЦ по методам, установленным в НД на корма и (или) в методиках испытаний.

ОС на основании протокола испытаний сертифицируемых кормов, заключения по анализу состояния производства, выданного соответствующим аккредитованным органом (если это предусмотрено схемой сертификации), оформляет сертификат соответствия и выдает его заявителю, который вступает в силу с момента его регистрации в реестре органа по сертификации сертифицированных кормов. Срок действия сертификата соответствия, выданного на партии кормов, устанавливает ОС в зависимости от их срока годности при условии полного соблюдения режимов хранения согласно «Правил сертификации кормов и кормовых добавок на соответствие требованиям безопасности» [263].

1.4. Значение микро- и макронутриентов в физиолого-биохимических процессах организма животных Благодаря комплексным биохимическим исследованиям определена потребность живых организмов в адекватном количестве энергии, незаменимых пищевых веществах, а также большой группе минорных биологически активных соединений. Среди них - микроэлементы, витамины, аминокислоты, без участия которых не реализуются генетически детерминированные физиолого- биохимические процессы живых организмов.

Нутрициологический фактор несомненно оказывает влияние на становление физиолого-биохимического статуса птицы, особенно в условиях интенсивных технологий выращивания, поскольку устойчивость живого организма к различным неблагоприятным факторам внешней среды в период роста, развития и адаптации во многом определяется складывающимся на данный период его жизни оптимальными концентрациями микронутриентов в клетках, тканях и органах, способствующих полной реализации физиологических и биохимических процессов [24, 140, 194, 212, 266, 293, 378].

1.4.1. Энергетический обмен и патология обмена энергии Потребность в энергии обусловлена затратами энергии на движение и основной обмен веществ, которые зависят от физиологического статуса животных или птицы, возраста, породы, условий их содержания и т. д. [209].

В частности, деятельность нервной и эндокринной систем регулирует обмен энергии, который находится в постоянной взаимосвязи с окружающей средой и питанием. В свою очередь, продуктивность животных и птиц также обеспечивается поступлением с кормом питательных и биологически активных веществ, которые необходимы для получения энергии и стимуляции обменных процессов [176, 209, 336].

Образование энергии нарушается при голодании. Чувствительность к голоданию у животных выражается в зависимости от возраста, у растущих животных чувствительность значительно выше [3].

Недостаток отдельных питательных веществ или питания в целом способствует разрыву физиолого-биохимических процессов в клетках организма, что в свою очередь приводит к нарушению энергетического обмена, вследствие чего могут происходить морфологические изменения в органах и тканях и функциональные расстройства у животных [24, 378].

Несбалансированное кормление животных значительно снижает их резистентность к заболеваниям [36, 254]. Основной причиной незаразных болезней среди животных являются нарушения обмена веществ в организме, в том числе минерального обмена [181]. При недоедании у животных в организме изменяется уровень гормонов и активность ферментов, существенно измененяются микроструктура и функции клеточных систем организма.

Важную роль в протекании энергетических процессов в организме играют углеводы и жиры, которые положительно влияют на все системы организма [5, 6, 180, 197]. Некоторые ненасыщенные жирные кислоты являются незаменимым фактором [209, 462]. Однако, как недостаток, так и избыток жиров и углеводов является нежелательным [25, 153, 189, 216, 246, 291, 308].

Энергетические процессы обусловлены также концентрациями и активностью большого числа гуморальных факторов (продукты обмена, витамины, гормоны и т.д.).

1.4.2. Влияние белков и аминокислот на обменные процессы Белки, как углеводы и жиры, также относятся к основным питательным веществам, дефицит которых в рационе приводит к развитию различных патологий. Без обеспечения животных энергией и полноценным протеином невозможно получить полноценную продукцию в животноводстве [5, 31, 223, 297].

Различные экспериментальные данные отечественных и зарубежных исследователей доказали, что не только количество, но и соотношение заменимых и незаменимых аминокислот в белке определяет биологическую ценность корма [150]. Жизненно значимыми определелись 20 аминокислот, среди которых - заменимые, частично заменимые и незаменимые. Было показано, что хронический недостаток или отсутствие незаменимых аминокислот в организме приводит к потере массы и в конечном итоге к гибели. Во всех случаях недостатка в рационе кормов хотя бы одной незаменимой аминокислоты, отчетливо наблюдалась потеря аппетита практически с первого дня. Эти результаты легли в основу дальнейших исследований и положили начало более системному изучению роли белкового и аминокислотного питания на физиологию свиней и птицы [46, 150, 313, 334, 337, 342]. Была определена роль отдельных аминокислот в жизнедеятельности высших животных. Обнаружилось, что дефицит метионина и цистина вызывает снижение тонуса мышц, дистрофию печени, кровоизлияния в почках, слабость тазовых конечностей. При попытке установить необходимые пропорции метионина и цистеина были получены противоречивые результаты, особенно в случае синтетических рационов.

Потребность метионина при синтетических рационах для бройлеров составила 22-55 мг/кг [377]. При недостатке лизина уменьшается отложение подкожного жира, возникает сухость кожи, а также снижается синтез гемоглобина, уровень сывороточных белков, ухудшается усвоения азота корма [46, 54]. Повышение концентрации лизина в рационе кормов сократило содержание цистеина и снизило уровень потребления. Хелатные соединения метионина и лизина положительно влияют на эмбриогенез птиц [271]. Дефицит триптофана сопровождается помутнением хрусталика роговицы глаза, а также выпадением шерсти. Имеются данные, что рост концентрации линоленовой кислоты и свободного триптофана в плазме крови цыплят зависит от количества триптофана в их рационе [438] и т.д.

Недостаток аргинина или валина способствует нарушению функций нервной системы в виде расстройства координации движения, судорог. Валин, как и глицин влияет на регенерацию гемоглобина. Уровень гемоглобина снижается при недостатке гистидина [396]. Это подтверждается высоким содержанием этой аминокислоты в молекуле гемоглобина.

Отсутствие, даже временное, всех аминокислот сопровождается не только потерей массы тела, но и атрофией мышц, гипопротеинемией и анемией; организм становится более восприимчивым к инфекциям и незаразным болезням. Дефицит аминокислот приводит к падению гемоглобина, гематокрита, активности некоторых ферментов [160]. При избытке определенной аминокислоты нарушается сбалансированность всего аминокислотного состава. Это может стать также причиной нарушения синтеза другой аминокислоты. Так, антагонизм установлен между лизином и аргинином, лейцином и изолейцином, валином и лейцином, триптофаном и треонином.

Отсутствие хотя бы одной незаменимой аминокислоты снижает эффективность всего рациона. В кормах животного происхождения, в частности мясокостной муке, как правило содержатся все незаменимые аминокислоты. Однако, они могут содержать возбудители различных инфекций. Примером может явиться вспышка ячеистой энцефалопатии у коров при использовании мясокостной муки из костей овец, которая вызвала массовый отход животных и нанесла существенный экономический ущерб.

Как избыток, так и недостаток незаменимых аминокислот затрудняет биосинтез белка, поэтому важным для организма животного является не только количество отдельных или нескольких аминокислот, но и поступление их в определенных соотношениях [357], вследствие чего необходимо учитывать потребность и поступление их в организм.

Аминокислотный состав синтезируемых белков определяет количественную потребность в тех или иных аминокислотах, которая повышается при беременности, травмах или заболеваниях. В этом случае аминокислоты необходимы для дополнительного синтеза клеток белков, молока, крови. Есть данные, что повышение концентрации аминокислот в корме цыпленка или крысы не влияет на аминокислотный состав белков тела, но в случае избытка аминокислот приводит к увеличению их содержания в крови [58, 196].

В организме при нормальной деятельности должно происходить непрерывное обновление белков. Для разных белков скорость обновления различна. Так, 10% белков плазмы крови обновляются за сутки, около 50% белков печени - за неделю, а гемоглобин – за 28-30 дней [258].

Недостаток или отсутствие в рационе заменимых аминокислот, важное значение которых для организма также установлено [355], приводит к снижению синтеза белка, увеличению потребления незаменимых аминокислот Синтез заменимых аминокислот в организме [150].

осуществляется за счет продуктов метаболизма углеводов, азотистых оснований, карболита и цитрата аммония [376]. Соотношение заменимыенезаменимые аминокислоты также имеет значение [414]. Так, азот продуктивно используется и лучше усваивается курами-несушками, если в рационах кормов соотношение заменимых аминокислот к незаменимым составляет 1,0: 0,8.

Недостаток белков и аминокислот в организме способствует нарушению обмена веществ, которому подвержено не только взрослое поголовье, но и молодняк. В результате нарушения обмена веществ ухудшается работа органов пищеварения снижается [221], воспроизводительная способность, устойчивость к инфекционным заболеваниям [59, 164, 278, 334]. Обеспечение в промышленных условиях животных качественными белковыми кормами, в которых аминокислоты содержатся в необходимых соотношениях предотвращает [443], экономический ущерб, улучшает качество продукции.

В организме нет резервных белков, поэтому при голодании в первую очередь расходуются белки плазмы крови, что в свою очередь приводит к снижению иммунитета, а затем печени и мышц, приводящие к гипотрофии.

Аминокислоты, не использованные для синтеза белка, подвергаются ферментным превращениям в процессе дезаминирования и декарбоксилирования. Амины, образующиеся при декарбоксилировании аминокислот, являются биологически активными соединениями, участвуя в биохимических процессах, но в больших концентрациях опасны для организма. Этот возможный негативный эффект нивелируется малым масштабом процесса декарбоксилирования аминокислот, а также благодаря ферментам, выступающими катализаторами окисления образующихся аминов до альдегидов и аммиака с последующим окислением до жирных кислот и дальнейшему распаду на воду и углекислый газ.

1.4.3. Роль витаминов и минеральных веществ в физиологических процессах в организме животных Витамины и минеральные вещества являются регуляторами биохимического и функционального статуса организма. Их дефицит всегда сопровождается снижением адаптационного потенциала живого организма.

Известно, что в организме птицы тиамин – витамин В1 не синтезируется, поэтому он должен поступать с кормами [258]. Ранние симптомы В1 авитаминоза у сельскохозяйственной птицы проявляются в судорожном запрокидывании головы, легкой возбудимости, нарушениях сердечной и мышечной деятельности, а также моторных функций желудочно-кишечного тракта. Недостаток фолиевой кислоты у птицы вызывает задержку роста, лейкопению и анемию, как следствие нарушение кроветворной функции, что может привести к падежу от инфекций. Общий недостаток витаминов группы В чаще всего вызывает гипохромную анемию и расстройства центральной нервной системы.

Неполноценное питание у птицы вызывает авитаминоз по витамину С, который стимулирует синтез гормонов и ферментов, участвует в транспорте электронов дыхательной цепи, в метаболических процессах обмена клеточных мембран. Оказывает положительное влияние на гуморальные показатели крови [217, 431, 454].

Авитаминоз по витамину Н сопровождается выпадением перьев у цыплят и индюшек. Витамин Р содействует протеканию окислительновосстановительных процессов, являясь синергистом витамину С.

В кормовой добавке на основе продуктов пчеловодства присутствуют также все жирорастворимые витамины. При недостатке витамина А у птицы развивается метаплазия эпителия, которая проявляется в виде затруднения дыхания и закупоркой дыхательного горла ороговевшим эпителием.

Недостаток витамина D в организме птицы приводит к замедлению образования костей и их декальцинации. Витамин Е улучшает репродуктивные функции птицы. Его недостаток вызывает дегенеративные изменения мышечной ткани, нарушается процесс фосфорилирования креатина. Витамин К регулирует свертываемость крови и участвует в процессах дыхания клеток.

Жизненная необходимость минеральных веществ обусловлена наличием их специфической метаболической функции [59, 164, 192, 239].

Согласно М.Риш (1993) выделяются три основные функции минеральных веществ в организме, которые тесно связаны между собой и могут осуществляться одновременно: поддержание биологически активного конформационного состояния молекул; образование сложных комплексов между субстратами, ферментами и коферментом; изменение электронной структуры молекул субстрата.

Минеральные элементы по незаменимости для организма животных по существующей классификации [68, 164, 169, 331] делятся на: абсолютно незаменимые, небезразличные для организма, возможно незаменимые.

Роль минеральных веществ в питании сельскохозяйственных животных чрезвычайно велика, хотя они и не имеют энергетической ценности [129, 165]. Минеральные вещества, находящиеся в организме животных, входят в состав структурных образований и участвуют в синтезе сложных органических соединений, например нуклеопротеидов [331]. Как недостаток, так и избыток микро- и макроэлементов в рационах снижает продуктивность и плодовитость и может вызывать различные заболевания. Так, недостаток в кормах кальция и фосфора, которые составляют 75% всех минеральных веществ в теле животных, является причиной рахита животных, остеомаляции, мягкости яичной скорлупы и т.д. В случае, когда в кормах недостаточно минеральных веществ, необходимых организму, минералы в составе крови могут пополняться из минерального депо [181, 313].

В литературе много ссылок на работы, посвященные изучению минерального обмена, в котором значительна роль минеральных веществ [8, 15, 58, 69, 115, 165, 174, 185, 277, 331].

Нормальное функционирование организма возможно только при кислотно-щелочном равновесии, которое регулируют минеральные соли.

Некоторые пищеварительные ферменты (пепсин) действуют в присутствии водородных ионов соляной кислоты, а другие (трипсин) – в щелочной среде в присутствии гидроксильных ионов.

Калий и натрий в виде хлористых, фосфорнокислых, углекислых и сернокислых солей необходимы для обеспечения кислотно-щелочного равновесия в организме [12, 14, 164].

Обмен минеральных элементов в организме представляет собой не только обмен их неорганических солей. Фосфор, сера, железо, медь и др.

входят в состав органических соединений, обладающих биологической активностью. Железо в составе железосодержащих ферментов, участвует в тканевом окислении, в составе цитохромов способствует перемещению электронов в дыхательной цепи. Фосфор участвует в процессах гликогенолиза и гликолиза, окислении жирных кислот, распаде белков, в процессе гормональной регуляции функции организма [26, 70, 113, 165, 176, 216, 331, 343]. Фосфор отвечает за рост и поддержание целостности костной ткани и зубов и в этом главная его функция. Во многих органах фосфор содержится в виде фосфотидов [36, 331]. Фосфор подобно кальцию является обязательным компонентом для поддержания гомеостаза организма, необходимо поддержание постоянства его в организме [68, 268]. Высокое содержание фосфора в организме нарушает всасывание магния, вследствие чего увеличивается потребность организма в последнем [174, 181].

Значительная часть кальция в организме связана с белками. Этот минерал присутствует в крови и в составе всех тканей птицы [14, 195].

Оказывает положительное влияние не только на костную систему птицы, но и на плотность скорлупы [162, 277, 331]. Баланс кальция влияет на клеточную проницаемость, нервную возбудимость, сократительную деятельность сердца, на процессы свертывания крови [345]. Нервные клетки мозга, железы внешней и внутренней секреции также содержат много кальция. В плазме крови соли кальция способствуют образованию фибриногена [170]. Кальций влияет также на проницаемость стенок кровеносных сосудов, увеличивает устойчивость к инфекционным заболеваниям [215].

Обмен Са и Р определяет характер изменения других биохимических показателей в жидких средах организма птицы [40,432]. Кальций и фосфор в основном локализуются в мышечной, хрящевой и костной ткани. Они влияют на уровень минерализации организма и почти на все виды обмена.

Нарушение фосфорнокальциевого обмена может происходить при недостаточном всасывании кальция в желудочно-кишечном тракте либо избытке в рационе некоторых микроэлементов, являющихся его антагонистами; [27, 110, 113, 184, 194, 307, 319, 336]. Соотношение фосфор кальций в организме животных имеет особое значение, в частности влияет на плодовитость [29, 368, 369, 391, ].

На всасывание кальция влияют кальциферол, фосфаты, лактоза. Жиры, кортизон, тироксин снижают всасывание кальция из желудочно-кишечного тракта, а белки, лактоза, аминокислоты напротив повышают его [184, 229, 408]. Поскольку обмен кальция регулируется эстрогенами, а также гормонами щитовидной и паращитовидной железы, то избыток его в рационах кормов животных угнетает функции паращитовидных желез [319, 384].

Магний активирует процессы окислительного фосфорилирования в митохондриях клеток [14, 37, 51]. Его недостаток является причиной изменения структуры тканей и нарушения обмена углеводов и фосфора.

Магний ухудшает использования калия в случае их одновременного избытка в организме [185, 194].

Медь, как составная часть металлопротеидов, регулирующих окислительно-восстановительные реакции клеточного дыхания, фотосинтеза, усвоение азота, влияет на рост, развитие, обмен, воспроизводство, фагоцитарную активность лейкоцитов, процесс образования гемоглобина [155, 164, 193, 239, 269]. Уровень меди в корме ниже 0,7 г/т способствует развитию ее дефицита у несушек, что сопровождается падением гемоглобина, активности ферментов, что в итоге приводит к снижению продуктивности [128, 331]. Всасывание меди в желудочно-кишечном тракте при ее дефиците в рационе возрастает в 2 раза и снижается с увеличением поступления этого элемента. Цинк и кадмий препятствуют всасыванию меди.

Липотропное действие марганца проявляется при стимуляции синтеза холестерина в жирных кислотах. Синтез глюкозамингликанов хрящевой ткани, эритропоэз и образование гемоглобина также проходит с участием марганца. Недостаток марганца в организме проявляется в виде задержки роста и развития, дефекта костеобразования, расстройства нервной системы и нарушения репродуктивной функции [70, 192].

Физиологическая активность кобальта, который также является важным микроэлементом, проявляется в процессах кроветворения и обмена веществ. Кобальт влияет на гемопоэз, размножение и рост организмов. Он участвует в эндогенном синтезе витамина цианкобаламина, а также гемоглобина и его недостаток вызывает первичную анемию [182, 236, 390].

Цинк участвует в процессе дыхания, и это его основная роль в организме. Он входит в состав ряда важнейших ферментов, участвует в обмене нуклеиновых кислот и синтезе белков [28, 170,]. Избыток цинка в организме маловероятен. Сельскохозяйственная птица переносит без последствий 20-30-ти кратные дозировки цинка [182].

Другие минеральные вещества также необходимы для нормальной жизнедеятельности организма, их недостаток может приводить к нарушению минерального обмена в организме животных. Содержание минеральных веществ в кормах зависит от агропочвенных и климатических зон и может колебаться, как правило, в сторону занижения. Однако нарушение минерального обмена может вызываться как недостатком, так и избытком минеральных веществ [58, 150, 165, 169, 176, 219, 251, 294, 322, 345].

1.4.4. Особенности обмена веществ у животных и птицы в условиях промышленных технологий получения животноводческой продукции Актуальность ветеринарно-экологических проблем создания оптимальной среды для птицы вытекает из специфики промышленной технологии, имеющейся в современном птицеводстве: высокая концентрация, высокая продуктивность, сочетание с дифференцированными требованиями к качеству мяса. Современная производственная среда выращивания сельскохозяйственной птицы включает антропогенные изменения биотических и абиотических экологических факторов [52]. В силу того, что при промышленном выращивании птица находится в условиях недостатка естественного освещения, ограниченности движения скорость метаболических процессов может меняться, нарушаться водно-солевой баланс и др. Условия содержания птицы влияют также на состояние нервной, эндокринной систем, и как следствие на энергетический обмен. Поэтому для нормализации обмена веществ у птицы обеспечение организма всеми необходимыми питательными веществами приобретает особое значение.

Для более полной реализации генетического потенциала современных кроссов, особенно в условиях интенсивных технологий производства и содержания птицы, необходимо совершенствовать рационы и системы кормления, схемы применения кормовых добавок (ферментов, антимикотоксинных препаратов, источников микроэлементов и т.п.), а также разрабатывать методы повышения усвояемости кормов [309].

Таким образом, для получения качественной продукции птицеводства, необходимо обеспечить оптимальное течение процессов обмена веществ в организме птицы [50].

1.5. Современные тенденции в кормлении сельскохозяйственной птицы Проблема полноценного питания птицы современных кроссов является многосторонней и включает охрану здоровья птицы, качество и безопасность конечной продукции. Несмотря на то, что в птицеводстве применяются отработанные технологии кормления [33, 135, 137, 333], острым остается вопрос поиска новых источников для производства безопасных, эффективных кормов и кормовых добавок.

Согласно литературных источников продуктивность сельскохозяйственной птицы и качество птицеводческой продукции зависит от качества комбикормов. Так, рационы, рецептура которых содержит местные зерновые корма, зараженные микотоксинами и имеющие повышенное содержание тяжелых металлов, могут оказывать на организм птицы канцерогенное действие [209, 301, 310, 311]. В работе [9] указывается, что в таких кормах значительно снижается количество аминокислот и витаминов группы В, в частности наполовину тиамина и рибофлавина.

Для оптимизации питания и коррекции обменных процессов у бройлеров и кур-несушек, повышения у них КПД рационов, уменьшения их микробной контаминации и улучшения микробиоценоза пищеварительного тракта, естественной резистентности, развития репродуктивных функций, продуктивности и получения экологически чистой продукции целесообразно включать в состав комбикормов сорбирующие и антиоксидантные кормовые добавки [138].

Так, например одним из современных направлений в технологии кормления птицы является использование комплексов, содержащих сорбирующие кремнийсодержащие минералы, а также пробиотических и пребиотических кормовых добавок [43, 159, 165, 246, 285, 302, 305, 309, 347].

В работе [68] подчеркивается, что в течение всего периода производственного цикла для сохранности птиц, а также с целью повышения яичной и мясной продуктивности, в корме должны присутствовать макро- и микродобавки. Полноценное сбалансированное кормление должно включать в себя все необходимые энергетические, пластические, биологически активные вещества, без которых невозможно обеспечить высокую продуктивность птицы [161, 309, 310].

Одним из простых способов повышения содержания микроэлементов в организме животных является обогащение микроэлементами кормов, в частности силоса или сенажа. Природные цеолиты улучшают физикохимические свойства мяса, молока и яиц [134, 158, 347]. Некоторые исследователи отмечают эффективность испытания хелатных компонентов биогенных металлов в птицеводстве с использованием белково-минеральных витаминных добавок [55]. Так, в некоторых работах показан эффективный способ обогащения инкубаторных яиц хелатной формой аспарганата марганца с помощью вакуума, за счет более высокой степени проницаемости через биооболочку куриного яйца [44, 49]. Установлено положительное влияние на эмбриогенез птиц хелатных соединений метионина и лизина [120].

В качестве кормовых добавок для птицы предлагается использовать также клипоптилолиты, шелуху кедровых орехов, водоросли и т.д. [15, 242, 338].

Итак, различные биологически активные комплексы оказывают протективное, а также консервирующее действие на кормосмеси. Они способны обогащать их витаминами, аминокислотами и микроэлементами, стимулировать метаболические процессы в организме птицы, улучшать вкусовые качества конечной продукции [35, 132, 172, 238].

Приоритетным является применение естественных стимуляторов роста, которые лучше усваиваются, являясь экологически чистыми и безопасными для организма [71, 187, 310]. За счет того, что в натуральных кормовых добавках биологически активные вещества находятся в оптимальном соотношении, использование их в рационах способствует получению положительного биологического эффекта в организме птицы.

В настоящее время прослеживается тенденция по разработке кормов, премиксов, кормовых добавок для птицы за счет освоения новых сырьевых источников и развития технологической науки. Одним из перспективных источников сырья для производства инновационных кормовых добавок являются возобновляемые маловостребованные продукты пчеловодства, содержащие в своем составе обширный комплекс витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов [17, 18, 288, 320, 370, 387, 382, 412, 434]. Однако в настоящее время нет фундаментальных комплексных исследований по изучению физиологического действия продуктов пчеловодства на организм животных и использованию их в качестве сырьевых источников для промышленного получения кормовых добавок.

Таким образом, внедрение инновационных технологий кормления сельскохозяйственных животных и птицы является приоритетным направлением в агропромышленном секторе экономики страны (Решение Коллегии Министерства сельского хозяйства РФ № 15 от 29.11.11), результатом чего должно явиться повышение сохранности поголовья, продуктивности, улучшение состава, вкусовых качеств и экологической чистоты продукции.

1.6. Вторичные сырьевые ресурсы пчеловодства как источники макро- и микронутриентов Окружающая среда, являясь изменчивой структурой, действует и на живой организм, к чему имунная система, являясь сложной многокомпонентной системой, чувствительной к воздействию различных факторов, не успевает или не может адаптироваться. Это ослабляет иммунный ответ и ведет к росту иммунозависимой патологии и хронизации заболеваний [214]. Для укрепления иммунитета и профилактики заболеваний необходимы стимуляторы факторов неспецифической защиты, к которым относятся некоторые природные вещества как растительного, так и животного происхождения [460]. В связи с этим в последние десятилетия идет активный поиск высокоэффективных биологически активных субстанций природного происхождения, способных восполнить потребность в жизненно важных нутриентах как у человека, так и у животных. Вне всякого сомнения продукты пчеловодства являются одними из наиболее перспективных в этом направлении.

Такие продукты пчеловодства – мед, прополис, маточное молочко, пыльца, пчелиный яд, воск и т.д. - находят широкое применение в разных областях народного хозяйства [387]. Однако, продолжает оставаться малоиспользованным целый пласт вторичных продуктов пчеловодства, среди которых можно отметить пергу и мерву.

С 60-х годов ХХ-ого столетия, когда в трудах мировой организации Апимондия, занимающейся изучением продуктов пчеловодства, впервые стали появляться публикации о перге, она заинтересовала исследователей как комплекс биологически активных веществ. В перге содержится большое разнообразие микронутриентов, сбалансированных по составу, что обеспечивает их взаимный синергизм, ее исключительную биологическую активность и биодоступность. Исследования физиологического действия пчелиной перги находятся сейчас в активной стадии [361, 382, 407].

Пчелиная перга — это цветочная пыльца (обножка), собранная пчелами, уложенная и утрамбованная в ячейки сотов и залитая ими мёдом [362, 387]. Пчела заготавливает пергу в период цветения растений (рисунок

1) для кормления нового расплода и формирования запасов для будущего расплода (http://www.perga.ru/index.htm).

Химический состав перги в отличие от пыльцы более изменчивый. В пыльце содержится много белков. В 100 г пыльцы содержится столько же аминокислот, как в 500 г качественной говядины или в 7 яйцах.

–  –  –

На рисунке 2 приведен сравнительный количественный состав некоторых незаменимых аминокислот в пыльце и в общеупотребимых продуктах (http://sampaseka.ru/piltsa.html).

–  –  –

Поскольку пчелы приносят пыльцу с самых различных растений, а пыльца каждого растения обладает своими свойствами [440], перга более разнообразна по химическому составу по сравнению с пыльцой.

Неоднороден также не только качественный, но и их количественный состав.

Основное их отличие заключается в том, что составные части перги, в том числе аминокислоты, лучше усваиваются живыми организмами, поскольку кутикулы пыльцевых зерен пыльцы в процессе получения пчелиного хлеба разрушаются. В анаэробных условиях процесса молочнокислого брожения под воздействием ферментов, бактерий и дрожжевых грибов в ячейках сотов возрастает содержание молочной кислоты, которая консервирует смесь пыльцы с медом и превращает ее в пергу. В результате этих процессов перга приобретает новое качество - практическое отсутствие аллергизации в отличие от пыльцы [362].

Итак, перга – это пчелиная обножка, сложенная и утрамбованная пчелами в соты (рисунок 3), законсервированная медово-ферментным составом и прошедшая в течение двух недель молочнокислое брожение, в результате чего повышается биодоступность компонентов и нивелируются аллергенные свойства [412].

–  –  –

В перге находится комплекс уникальных соединений: гемопоэтические элементы — железо, кобальт, медь, витамины В12, В9, С; антиоксиданты — витамины А, С, Е, а также биофлавоноиды, медь, марганец, селен, цинк;

незаменимые и заменимые аминокислоты; ненасыщенные жирные кислоты [17, 18]. В перге за счет гемопоэтической группы особенно выражены антианемические свойства, причем перга более эффективна по сравнению с пыльцой. Так, известны положительные результаты лечения пергой гипохромной анемии [108, 203].

Витаминная группа представлена практически всеми жиро- и водорастворимыми витаминами. Максимальная эффективность при минимальной концентрации витаминов в суточной дозе (4 г) происходит за счет полной усваиваемости перги организмом, при этом риск гипервитаминозов исключается.

В пчелином хлебе содержатся все заменимые и незаменимые аминокислоты. Помимо этого в нем содержится около 30 макро- и микроэлементов (особенно гемопоэтической группы) в соотношениях, близких к физиологическим, которые дают эффект за счет природного сочетания с аминокислотами и витаминами [288].

В пчелином хлебе присутствуют также незаменимые факторы питания, предшественники образования метаболически активных эйкозаноидов арахидоновая, линолевая и линоленовая кислоты, способные ослаблять воспалительный ответ при ревматоидном артрите [434].

Перга имеет выраженный иммуномодулирующий и соматопротекторный эффекты, и не обладая кумулятивным, аллергенным и раздражающим действием, с успехом может применяться как с профилактической, так и лечебной целью. Она способствует повышению содержания в крови эритроцитов, ретикулоцитов и гемоглобина, обеспечивает нормализацию количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы, обладает выраженными антитоксическими свойствами [320]. В условиях экспериментального заражения животных вирусом гриппа были полученные данные противовирусного действия перги [145]. Вероятно, перга способствует выработке ингибиторов, аналогичных интерферону. Согласно [370], перга способствует быстрому выведению радионуклидов, вредных химических веществ, солей тяжелых металлов из организма, в целом улучшает работу органов и систем организма.

Таким образом, продукты пчеловодства, в частности перга и пыльца, позволяют повысить адаптационный потенциал живого организма.

Ценным сырьем для промышленной переработки является также пасечная вытопка, или мерва, в которой неразличимы отдельные коконы ячеек. Она бывает двух видов — пасечная и заводская. Пасечная мерва – темно-коричневая, бурая, комковато-рассыпчатая, не должна быть поражена восковой молью, плесенью, массовая доля воды в ней не более 10 %, а содержание воска от 30 до 50%. Мерва пасечная получается при пасечной переработке воскового сырья развариванием в кипящей воде и последующим отпрессовыванием воска. В процессе переработки большая часть растворимых веществ переходит в воду.

Заводская мерва - отход воскоперерабатывающих заводов, после переработки пасечной мервы гидравлическими прессами или центрифугами образуется в результате воздействия острого пара на пасечную вытопку. Она

– коричневая или черная, с комковатой неплотной структурой, с массовой долей воды не более 10 % и массовой долей воска от 18 до 25 %. Допускается наличие в заводской мерве дренажной соломы не более 5 % [330].

Если мерва получена из воскопресса, то в отходах содержится до 80% воды. Мокрая мерва, особенно полученная после перетопки суши, пораженной молью, быстро портится и плесневеет, и количество воска, содержащееся в ней, существенно снижается [32].

Наличие в мерве и перге микроэлементов и каротиноидов, а также других биологически активных веществ делает актуальной оценку эффективности их применения в качестве ростостимулирующих и антистрессовых добавок в кормлении как мясных, так и яичных кроссов сельскохозяйственной птицы.

1.7. Заключение по обзору литературы В настоящее время при получении качественной продукции животноводства отмечается тенденция по разработке продуктов нового поколения, отвечающих современным требованиям к питанию [256, 304].

Ключевое значение приобретают вопросы качества и конкурентоспособности продукции отечественного производства. В связи с этим, с целью обеспечения населения безопасными и качественными продуктами питания, разрабатываются новые направления, ставятся новые задачи перед ветеринарно-санитарной экспертизой продукции, призванной осуществлять контроль на наличие в ней полезных нутриентов и свойств, на загрязнение ксенобиотиками и т.д. [78, 205, 272, ].

Российское птицеводство вносит значительный вклад в обеспечение населения высококачественной продукцией, которая составляет около сорока процентов в мясном балансе потребления населения страны [107, 311].

Анализ литературных источников показал, что качество конечной продукции птицеводства определяет состав кормов и кормовых добавок, используемых в рационах птицы [35, 44, 49, 132, 134, 158, 171, 172, 209, 238, 301, 310, 347]. Кроме того, на качество и технологические свойства мяса и яиц оказывает влияние физиолого-биохимический статус птицы. При недостатке некоторых питательных веществ в организме происходит разрыв клеточных биохимических процессов. Это может приводить к различным изменениям в органах и тканях животных [24, 140, 192-194, 212, 226, 266, 293, 310, 378], что в свою очередь способствует снижению качества продукции.

Из приведенного обзора следует, что в полноценном сбалансированном кормлении должны содержаться все необходимые энергетические, пластические, биологически активные вещества, которые призваны обеспечить здоровье птицы, ее высокую продуктивность, а в конечном итоге безопасность и качество конечной продукции [161, 164]. В связи с этим актуальным является совершенствование норм кормления, сбалансирование рационов, разработка новых кормовых добавок, способных оказывать положительное влияние не только на организм птицы, но и опосредованно на здоровье человека при употреблении мясной и яичной продукции. При этом многие исследователи [71, 166, 167, 187, 188, 310] считают наиболее эффективным использование макро- и микронутриентов природного происхождения, т.к. естественные стимуляторы роста - максимально безопасны для организма и лучше усваиваются.

Литературный обзор показал, что к современным направлениям в технологии кормления птицы относится использование пробиотических, пребиотических и антиоксидантных кормовых добавок; хелатных компонентов биогенных металлов; комплексов, содержащих сорбирующие кремнийсодержащие минералы и т.д. [15, 43, 55, 122, 138, 159, 165, 242, 246, 286, 302, 305, 338, 347].

Несмотря на то, что в птицеводстве применяются отработанные технологии кормления [33, 135, 137, 333], актуальным остается вопрос поиска новых источников для производства безопасных и эффективных кормов и кормовых добавок.

Анализ отечественных и литературных источников показал, что одним из перспективных источников сырья для их получения являются возобновляемые маловостребованные продукты пчеловодства - перга и мерва, содержащие в своем составе обширный комплекс витаминов, аминокислот, макро- и микроэлементов [17, 18, 288, 320, 370, 382, 387, 412, 434], вследствие чего могут являться естественными стимуляторами физиолого-биохимических процессов в организме птицы, способствуя улучшению вкусовых качеств и экологической чистоты конечной продукции птицеводства.

Таким образом, из проведенного обзора как отечественных, так и зарубежных литературных источников следует, что в настоящее время отмечается возрастающий спрос на качественную и экологически безопасную продукцию птицеводства. Поэтому к актуальным задачам ветеринарной науки относится поиск сырьевых источников для производства высокоэффективных натуральных кормовых добавок, проведение ветеринарно-санитарного контроля качества как сырья, так и целевых продуктов, а также изучение их влияния на организм птицы, что является обязательной частью в комплексной оценке качества мяса птицы и яиц.

В связи с этим данное диссертационное исследование посвящено научному обоснованию и оценке эффективности применения в птицеводстве кормовой добавки, разработанной на основе сырьевых источников пчеловодства.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнялась с 2002 по 2014 гг. на кафедре биологической и неорганической химии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана» в соответствие с государственной научно-технической программой «Разработка и внедрение новых методов и средств, обеспечивающих стойкое ветеринарное благополучие сельскохозяйственных животных, охрану населения от болезней, общих для человека и животных, высокое санитарное качество продукции и сырья животного происхождения», выполняемой по заданию министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Отдельные этапы исследования проводились в научноисследовательских лабораториях ВНИТИП РАСХН, на базе ФГБОУ ВПО «Казанский национальный исследовательский технологический университет», а также на производственных площадках ЗАО «Республиканский научно-производственный центр «Семруг», ООО «АНТ», птицефабрики ООО «Племенной птицеводческий репродуктор «Юдинский», индейководческого КФК «Марс» (Республика Татарстан), вивария ОНО «Загорское ЭПХ Всероссийского Научно-исследовательского и технологического института птицеводства РАСХН», ФГУП «Племенной птицеводческй завод СГЦ «Смена» Россельхозакадемии (Московская область).

Для решения задач была определена схема исследования, очертившая предмет, а также методы исследований данной работы (рисунок 4).

–  –  –

2.1. Определение составов биологически активных субстанций и кормовых добавок Для определения химического и аминокислотного состава субстанций и кормовых добавок применяли жидкостные хроматографы: LC-20 фирмы "Schimadzu" (Япония) с диодно-матричным и флуоресцентным детекторами;

SERIES 200 фирмы Perkin Elmer (США) с УФ детектором. Использовали спектрофотометр SPECORD 40 (AnalitykJena, Германия), pH-метр 211 (Hanna, Румыния), центрифугу Minispin Plus (Eppendorf, Германия), ультразвуковую ванну L-0,16/18 (Россия), установку для получения сверхчистой воды Simplicity Millipor (Франция).

Пробоподготовка проводилась по стандартным методикам, в том числе методом сухой микролизации. Суммарное содержание органических веществ в образцах определяли по исходной массе за вычетом зольного остатка.

Определение аминокислотного состава проводилось методом ВЭЖХ при детектировании их нингидриновых производных. Микроэлементный и липидный состав оценивали по стандартным методикам. В качестве стандартов определяемых веществ использовали стандартные образцы (Fluka и Sigma). Для приготовления элюентов использовали ацетонитрил для хроматографии ос.ч. сорт 0 (Криохром, Санкт-Петербург), ацетонитрил "Labscan" марки Ultra Gradient (Ирландия) и сверхчистую воду, полученную на установке MilliporWaters (США) из бидистилированной воды.

2.2. Определение антимутагенных эффектов

1. Приготовление образцов биокомплекса на основе перги Образцы биокомплекса на основе перги разводили в дистиллированной воде в концентрациях 1, 10, 100 и 1000 мкг/мл.

2. Тестерные штаммы.

Изучение токсических и мутагенных эффектов* осуществлялось в бактериальных тест-системах с использованием следующих бактериальных штаммов (таблица 3).

__________________________________________________________________

* D.G.Fatykhova, V.G.Evtugin, L.T.Akhmetova. Antimutagenic effects of "Vinibis" preparation // Abstracts of 13th annual Simposium for biology students of Europe "SymBioSE 2009" "Biology: Expansion of Borders".- Kazan, 2009.P.50.

<

–  –  –

Все тест-штаммы были получены из штамма Salmonella typhimurium дикого типа LT2 [351,352]. В геном бактерий с целью повышения чувствительности этих штаммов к химическим мутагенам и канцерогенам вводились добавочные маркеры. В данном тесте Эймса использовался мутантный штамм Salmonella typhimurium ТА 100 - hisG46, rfa, uvr-, ркт 101, bio-.

Мутация в гистидиновом опероне (his-) вызывает ауксотрофность по этой аминокислоте у мутантов. Штамм ТА 100 регистрирует мутации типа замены пар оснований (his G46).

Мутация в гене uvrB приводит к нарушению процесса эксцизионной репарации, благодаря чему возникшее повреждение ДНК остается неисправленным и, таким образом, увеличивается чувствительность тестерного штамма к некоторым мутагенам. Делеция в гене uvr В проходит также и через ген bio.

При ("шероховатые колонии") нарушается синтез rfa-мутации липополисахаридов, в результате чего клетка теряет патогенность, а также возрастает проницаемость ее клеточной стенки и облегчается проникновение мутагенов в клетку.

Штамм ТА 100 несет также плазмиду устойчивости к ампициллину рКт 101 и ген итиС, что увеличивает вклад ошибочной репарации в процесс мутагенеза, и, следовательно, чувствительность штамма [351,352].

В SOS-хромотесте используется штамм Escherichia coli PQ37, где к гену sfiA, входящему в число SOS-генов, "подшит" галактозный оперон. При экспрессии этого гена вырабатывается галактозидаза, которая дает при расщеплении субстрата (о - нитрофенил--галактопиранозида) окрашенный продукт.

3. Инкубационные среды, буферные растворы, химические агенты

Культивирование бактерий проводилось на следующих средах:

-Среда LB (%): пептон – 1,0; дрожжевой экстракт – 0,5;

-NaCl – 0,5; pH 8.5;

-Глюкозо-пептонная среда (ГПС,%): глюкоза – 0,5; пептон - 1; NaCl-0,5.

-Агаризованные среды LA включали дополнительно 2; 0,6% агара.

Клетки бактерий выращивали при температуре 37°С. В качестве инокулята использовали 18 ч культуру, выращенную на среде LB. Прирост биомассы измеряли на фотоэлектрокалориметре СФ-26 при 600 нм в кювете толщиной 1 см. Поглощение в 1 см кювете принималось за единицу биомассы. Количество биомассы выражалось в единицах оптической плотности. Для регистрации индуцированных от ауксотрофности к прототрофности ревертантов по гистидину S. typhimurium ТА 100 добавляли раствор биотина 0,25 мМ; 6.1 % биотина и раствор гистидина 0,5 мМ; 9.6 % L-гистидина солянокислого.

В качестве мутагенов применялись:

-N-Метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин (МННГ, 50 мкг/мл в ДМСО) - Serva Electrophoresis, Германия;

-Митомицин С (MC, 100 мкг/мл в дистиллированной воде) Sigma - Aldrich Chemie GmbH, Германия.

В эксперименте по определению количества колоний - ревертантов, претерпевших мутацию от ауксотрофности по гистидину к прототрофности, использовали следующие среды и растворы [351,352]:

-нижний агар (НА): 2% LA - 300 мл, 20% раствор глюкозы -10 мл ; солевой концентрат - 100 мл, 1% раствор сернокислого магния - 2 мл.

-0,6% верхний агар (ВА): 0,6% LA - 80 мл, раствор гистидина – 10 мл, раствор биотина - 10 мл.

-солевой концентрат (%): цитрат натрия трехзамещенный – 0,2; K2НР04хЗН20

-4,2; КН2Р04 -1,8; (NH4)2S04 – 0,4, растворенные в указанном порядке. Раствор автоклавировали при 1.0 атм.

-0,2М фосфатный буфер, РН 7.4.

При определении в SOS-хромотесте активности -галактозидазы и щелочной фосфатазы использовались буферные растворы и субстраты:

-Т-буфер: 1М Трис, pH 8.8

-Z-буфер: Na2HP04х7H20 – 16,1 г, NaH2P04хH20 – 5,5 г, KCL- 0,75 г, MgS04х7H20 – 0,246г, -меркаптоэтанол – 2,7 мл, вода дистиллированная мл, pH 7.0;

-4-нитрофенилфосфат (4 мг/мл в Т-буфере) и 4-нитрофенил- -Dгалактопиранозид (4 мг/мл в Z-буфере), Sigma — Aldrich Chemie GmbH, Германия.

4. Бактериальные тест-системы для определения токсических и мутагенных эффектов биокомплекса на основе перги

А) Тест на токсичность по отношению к грамотрицательным и грамположительным микроорганизмам В испытаниях на мутагенность для исключения возможности получения ложноотрицательных результатов проверка токсичности препарата по отношению к тестерным штаммам предшествует проверке на мутагенность. Оценка токсичности исследуемых препаратов проводилась по степени выживаемости тестерных штаммов. В тесте использовались штаммы Salmonella typhimurium ТА 100 и Micrococcus luteus.

Ход опыта:

1) За 12-15 часов до проведения эксперимента культуру тестерного штамма переносили с косяка в 5мл L-бульона;

2) 2% L-aгap разливали в чашки Петри;

Проводили разведения "ночной" культуры в стерильной 3) дистиллированной воде;

4) Растопленный 0,6% L-aгap разливали стерильно по 3 мл в пробирки и ставили на водяную баню при 45°С.

5) В пробирки с 3 мл полужидкого 0,6% L-aгapa вносили 0,1мл бактериальной суспензии нужного разведения и 0,1мл вещества в исследуемой концентрации. Раствор перемешивали и наслаивали на нижний питательный агар в чашки Петри. В негативный контроль вместо вещества добавляли 0,1мл растворителя. После 24 часов инкубации при 37°С подсчитывали число колоний в опыте и контроле и вычисляли "процент выживаемости" (С) или степень токсичности (Т) вещества по формулам:

С = ( а/в) х100%; T = 100 – С (%), где:

а - число колоний в опыте; в - число колоний в контроле.

Опыт проводился в трех повторах. При проведении теста Эймса максимальная доза исследуемых соединений не должна подавлять рост тестерных бактерий более чем на 50% [128].

Б) Полуколичественный метод учета генных мутаций Описание теста Эймса: тестерные штаммы бактерий S.typhiтипит культивируются на специальной среде, на которой могут расти лишь мутанты этих штаммов, у которых произошла мутация от ауксотрофности по гистидину к прототрофности. Без внешних воздействий эти мутации происходят с низкой частотой. При внесении в среду культивирования химического мутагена, частота мутаций значительно увеличивается, что можно зарегистрировать по числу колоний.

Ход опыта:

1) Подготовка культуры: культуру с косяка переносили петлей в 5 мл Lбульона и инкубировали при 37°С. При выращивании штаммов, несущих плазмиду рКт 101, в L-бульон вносили ампициллин в концентрации 50 мкг/мл. В день постановки эксперимента 5 мл «ночной» культуры переносили в 20 мл свежего L-бульона и инкубировали с принудительной аэрацией при 37°С в течение 2 – 2,5 часов. Затем культуру переносили в стерильные центрифужные пробирки и центрифугировали 20 мин при 5000 об/мин. Осадок ресуспендировали в 0,02М фосфатном буфере или растворе солевого концентрата, разведенном 1:4. Растворы исследуемых соединений готовили в стерильной дистиллированной воде.

2) В стерильные чашки Петри разливали 2% нижний агар.

3) В пробирки разливали 0,6% верхний агар с микродобавками биотина и гистидина по 3 мл и ставили на водяную баню при температуре 45°С.

4) В верхний агар вносили 0,1мл бактериальной суспензии и 0,1 мл исследуемого соединения. Все перемешивали и наслаивали на нижний селективный агар. После полного застывания чашки переносили в термостат при 37°С.

В негативном контроле в слой верхнего агара добавлялся 0,1мл растворителя. В качестве позитивного контроля использовался мутаген N-Метил-N-нитро-N-нитрозогуанидин (МННГ) (50 мкг/мл) или азид натрия (1 мкг/чашку).

5) Учет результатов проводился по индукции обратных мутаций к гистидиновой прототрофности через 48 часов инкубации. Сравнивалось число колоний-ревертантов в опыте и контроле.

В) S0S-хромотест S0S-хромотест является недорогим и высокоэффективным средством для определения мутагенной и канцерогенной активности практически любых органических и неорганических веществ и соединений. S0Sхромотест позволяет оценить ДНК-повреждающую активность вещества и вклад ошибочной репарации в общий мутагенез.

Эксперимент и приготовление сред проводили согласно методики, описанной в работах Р.Quillаrdet et al [426]. 12-часовую "ночную" культуру разводили свежим L-бульоном с добавлением ампициллина (20 мкг/мл) в отношении 1/3 и подращивали при 37°С с аэрацией до достижения экспоненциальной фазы роста, соответствующей оптической плотности 0.4 ед. при 600 нм (СФ-26, кювета 1 см). Затем бактериальную суспензию разводили L-бульоном в отношении 1/10 и разливали по пробиркам, содержащим исследуемые соединения. В качестве негативного контроля использовали растворитель, в позитивном контроле – супермутаген митомицин С (MC) в концентрации 2 мкг/мл, заведомо известный, как индуктор SOS-ответа клетки. Исследуемые смеси инкубировали в течение 2 часов при 37°С. После этого определяли активность щелочной фосфатазы и

-галактозидазы.

Г) Определение щелочной фосфатазы Влияние исследуемого соединения на выживаемость клеток определяли по уровню конститутивной экспрессии щелочной фосфатазы. В пробирки с 2,7 мл Т-буфера добавляли 300 мкл бактериальной суспензии и измеряли оптическую плотность при 600 нм. Затем для разрушения клеток в пробирки добавляли 0,15 мл хлороформа и 0,1 мл 0,1% SDS (додецилсульфат натрия). Смесь инкубировали на водяной бане в течение 5 минут при 28°С.

Реакцию запускали добавлением в пробирки с лизатами клеток 600 мкл раствора р-нитрофенилфосфата (4 мг/мл в Т-буфере) и инкубировали 25 минут при комнатной температуре. Для остановки реакции добавляли 1 мл 2М HCl. Через 5 минут добавляли 1 мл 2М Tris для стабилизации окраски. В каждой пробирке измеряли оптические плотности при длинах волн 420 и 550 нм на спектрофотометре.

Определение активности ферментов вели по формуле:

D420 1,75 D550 1000, где t V D600 D420, D550, D600 - соответствующие значения оптической плотности для реакционной смеси; 1,75 - поправочный коэффициент; t - время реакции, мин;

V - объем культуры, взятой для определения, мл.

Д) Определение активности -галактозидазы Из каждой опытной пробирки с бактериальной суспензией отбирали пробы по 300 мкл, добавляли их в пробирки с 2,7 мл Z-буфера и измеряли оптическую плотность при 600 нм. После добавления 0,1 мл 0,1% SDS и 0,15 мл хлороформа пробирки ставили в водяную баню при 28°С, выдерживали в течение 5 минут, затем пробирки встряхивали. Для определения активности

-галактозидазы в каждую пробирку с уже разрушенными клетками добавляли 600 мкл раствора о-нитрофенил-галактопиранозида (4 мг/мл в Zбуфере) и инкубировали 25 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливали добавлением 2 мл 1М Nа2СО3. Измеряли оптические

–  –  –

В случае, когда IF 2 - вещество считается негенотоксичным; когда фактор индукции IF 2 - вещество генотоксично.

5. Бактериальные тест-системы для определения антимутагенных эффектов биокомплекса перги

А) Модификации теста Эймса С целью исследования антимутагенных свойств образцов биокомплекса перги использовали модификации теста Эймса. Исследовалось влияние биокомплекса на уровень мутагенеза, индуцированного мутагеном

МННГ. Тест проводился в двух модификациях:

1) Для оценки десмутагенного эффекта мутаген и исследуемые концентрации биокомплекса на основе перги добавляли одновременно в верхний агар без предварительной инкубации с тестерным штаммом.

2) Для оценки возможных антимутагенных свойств тестерные бактерии предварительно инкубировали с различными концентрациями биокомплекса в течение 2 часов, затем в верхний агар добавляли МННГ в концентрации 50 мкг/мл.

Сравнение числа колоний прототрофов, индуцированных мутагеном без обработки клеток раствором исследуемого биокомплекса, и после преинкубации клеток с раствором биокомплекса и мутагеном позволяло оценить антимутагенный эффект исследуемого биокомплекса. В соответствии с Negishi с соавторами [419] ингибирование мутагенного эффекта менее чем на 25% означает слабый, от 25% до 40% - средний, выше 40% - сильный мутагенный эффект.

Б) Модификации SOS-хромотеста Для исследования на биоантимутагенную активность в первой 1) модификации SOS-хромотеста клетки Е. coli PQ37 обрабатывались в течение двух часов раствором биокомплекса на основе перги в различных концентрациях. После чего бактериальную суспензию разводили L-бульоном в соотношении 1:10 и разливали по пробиркам, содержащим растворы исследуемого соединения. В качестве негативного контроля использовали растворитель, в позитивном контроле – супермутаген митомицин С, заведомо известный, как индуктор SOS-ответа клетки, в концентрации 100 мкг/мл.

Исследуемые смеси инкубировали в течение двух часов при 37°С.

2) Во второй модификации исследуемые соединения и мутаген одновременно добавлялись к культуре клеток Е. coli PQ37, после чего определяли активность щелочной фосфатазы и галактозидазы (см.выше).

Определение свободного гистидина методом тонкослойной хроматографии С целью полуколичественного определения гистидина методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) готовят стандартные растворы гистидина в 10%-ном изопропаноле в концентрациях 10; 50; 250 мкг/мл. Минимально обнаруживаемая концентрация гистидина при использовании этого метода составляет около 7 мкг/мл. Образец, подготовленный соответственно требованиям, и стандартные растворы гистидина наносят на хроматограмму в количестве 10 мкл/пятно. Пластинки трижды хроматографируют в системе растворителей н-бутанол-уксусная кислота-вода (30:6:14). Длина пробега растворителя при этом составляет последовательно: 12,5; 6,25 и 12,5 см. После каждого прогона пластинку подсушивают на воздухе. По окончании разделения пластинку сушат при 40°С и обрабатывают 0,2%-ным раствором нингидрина в ацетоне, после чего нагревают в течение пяти минут при 80°С. Гистидин определяется в виде рыжекоричневых пятен на желтоватом фоне.

2.3. Фармако-токсикологические и физиолого-биохимические методы исследований Кормовая добавка (КД) «Винивет» первоначально исследовалась на острую и хроническую токсичность, аллергизирующее, ульцерогенное, кожно-резорбтивное, ирритантное, эмбриотоксическое, тератогенное действие на лабораторных животных, для чего были использованы 30 белых крыс, 60 белых мышей обоего пола, 12 морских свинок, 8 кроликов.

Влияние добавки «Винивет» на физиолого-биохимические процессы организма птицы, а также ее зоотехническая эффективность оценивалась в научно-исследовательских лабораториях и промышленных условиях птицеводческих предприятий*.

2.3.1. Кормовая добавка «Винивет»

Определение токсичности КД «Винивет»* проводилось в соответствии с общепринятыми методами [152, 207, 280].

Острая неспецифическая токсичность КД «Винивет» определялась в острых опытах на 48 беспородных белых мышах обоего пола массой 19±2,0 г, содержавшихся на стандартном рационе питания в условиях природного режима освещения помещения при комнатной температуре.

__________________________________________________________________

*А.М.Алимов, М.Ш.Алиев, Л.Т.Ахметова, Л.Н.Маковецкая, Ж.Ж.Сибгатуллин, И.А.Егоров. Определение безвредности и эффективности препарата «Винивет» в качестве кормовой добавки в птицеводстве. Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана.- 2012.-Т.209.-С. 3-10.

В экспериментальные группы животных отбирали по методу случайных выборок. Взвесь КД «Винивет» в воде вводили в желудок через зонд (per os). В контрольном опыте мышам вводилась вода дистиллированная в эквивалентгых опыту количествах. Время наблюдений за экспериментальными животными – 5 суток.

Для определения хронической токсичности 10 белым крысам в течение 30 дней добавляли 3% от массы корма КД «Винивет». По истечении 30 дней обе группы животных были убиты и патоморфологически исследованы.

Индекс селезенки определяли согласно формулы:

СИ= (МС / МТ) х 100, где:

СИ – индекс селезенки; МС –масса селезенки; МТ – масса тела.

Определение аллергизирующего действия добавки проводилась по стандартной гистаминовой реакции на морских свинках. Опытная группа получала корм с 2% КД «Винивет» в течение 14 дней, по истечении которых проводили гистаминовую пробу. Для этого морским свинкам подкожно вводили 0,1% раствора гистамина из расчета 6 мг/кг (ЛД50). После этого в течение шксти часов вели наблюдение за обеими группами животных.

Кожно-резорбтивное действие продукта изучалось на белых кроликах.

Аппликация изучаемой добавки проводилась на правом боку кролика, левый бок служил для контроля. 20 мл суспензии наносили на см2 выстриженного участка кожи. Нанесение суспензии кормовой добавки проводили открытым способом с помощью шпателя, предварительно приготовив суспензию на основе растительного масла. На контрольном участке использовали только растительное масло. Размер участка аппликации составлял 4х4 см. Опытным кроликам аппликации накладывали однократно на 4 часа, а также каждый день в течение недели. Исследовали реакцию кожи в сравнении с контрольным участком кожи, расположенном симметрично на другом боку кролика, через 1-16 часов после однократного нанесения суспензии и через 1часа после повторных нанесений. Эксперимент проводили в течение двух недель.

С целью определения местно-раздражающего действия кормовую добавку суспензировали 1:1 в дистиллированной воде и, периодически встряхивая, экстрагировали в течение 24 часов при 37° С, после чего фильтровали через бумажный фильтр. Отфильтрованный раствор в объеме двух капель вносили в конъюнктиву левого глаза кроликов; для сравнения в правый глаз, который являлся контролем, закапывали такой же объем дистиллированной воды. Затем, прижимая слезно-носовой канал, выдерживали в течение одной минуты, и проводили растирание века.

Местно-раздражающий эффект кормовой добавки определяли через два часа, а затем каждый день в течение недели.

Для определения ульцерогенного эффекта эксперимент проводился на 12 белых беспородных мышах обоего пола. Взвеси кормовой добавки «Винивет» в воде в дозах 500,0, 1000,0 и 2000,0 мг/кг тестировали при зондовом введении в желудок через рот (per os). В контрольном опыте мышам вводилась вода дистиллированная в эквивалентных опыту количествах. Через 3 часа животных убивали, извлекали желудки, рассекали их по малой кривизне, промывали в физиологическом растворе и рассматривали состояние слизистой желудка под бинокулярным микроскопом.

Эмбриотоксические и тератогенные свойства КД «Винивет» изучались на крысах со средней живой массой 268-280 г. В течение 15 дней и впоследствии в течение беременности контрольные группы в обоих исследованиях получали только кормовую смесь, а опытным группам в корм добавляли 3% (от массы корма) КД «Винивет». День обнаружения во влагалищных мазках крыс спермиев считали первым днем беременности.

Для определения эмбриотоксического действия через 19 суток крыс в обеих группах убивали, извлекали плаценту и плоды.

За время эксперимента для биохимических исследований в лабораторных условиях были использованы 160 образцов крови кур, цыплятбройлеров и индеек.

Эффективность кормовой добавки «Винивет» в производственных условиях исследовалась на большой выборке - 6880 птиц. Забор крови для гематологических исследований осуществлялся по стандартной методике [363]. Биохимические и иммунологические исследования проводились на случайных выборках по три цыпленка (куры, индейки) из каждой группы.

При определении общего белка в сыворотке крови птицы использовался рефрактометр. Кальций определялся трилонометрическим методом [13], а неорганический фосфор - согласно стандартным методикам.

Морфологический состав крови изучался по общепринятым методикам [114, 191, 363]. Определение лейкоформулы проводили согласно метода Романовского-Гимза путем подсчета окрашенных мазков крови. Суммарное количество эритроцитов и лейкоцитов в крови подсчитывали в камере Горяева. Содержание гемоглобина определяли при помощи гемометра Сали.

Спонтанный и стимулированный варианты НСТ-теста использовались для определения функциональной активности нейтрофилов крови по методике А.Козлюка в модификации А.Алимова [6]. В [179] стимулированном тесте применяли суспензию сальмонелл вакцинного штамма ТС-177. При просмотре ста нейтрофилов фиксировали активированные (формазанположительные – с четко выраженными отложениями диформазана) и неактивированные с (нейтрофилы пылевидными гранулами). Результат выражался в %.

Показатель резерва и коэффициент метаболической активации вычислялись по формулам:

ПР = АВ/СВ; КМА = (АВ-СВ) / СВ, где:

ПР-показатель резерва; АВ, СВ - формазанположительные клетки в стимулированном и спонтанном тесте, соответственно КМАкоэффициент метаболической активности.

Неспецифический фактор резистентности определяли по церулоплазмину в соответствии с методом Ревина.

Определение иммунологической реактивности цыплят в возрасте 30 дней осуществлялось на фоне вакцинации, для чего использовалась сухая вирусвакцина против болезни Ньюкасла из штамма «Ла-Сота». Реакции вируснейтрализации и гемагглютинации являлись критериями выработки специфических антител. Цитопатогенное действие проявлялось спустя трое суток. Степень подавления размножения вируса определялась по разности титров, выраженная в логарифмах.

2.4. Исследования зоотехнических показателей Эффективность кормовой добавки «Винивет» в производственных условиях исследовалась на большой выборке - 6880 птиц.

Для определения эффективности применения в комбикормах для птицы кормовой добавки «Винивет», в виварии ОНО «Загорское ЭПХ ВНИТИП» были проведены 2 опыта на 210 цыплятах - бройлерах кроссов «Кобб Авиан 48» и «Хаббард» и 1 опыт на 90 курах несушках кросса «Радонеж».

Рецепты экспериментальных комбикормов, используемых при выращивании цыплят-бройлеров для кроссов «Кобб Авиан 48» и «Хаббард»

приведены в таблицах 4 и 5, соответственно. В опытах цыплята выращивались с суточного до 37 (опыт 1) или 35- дневного возраста (опыт 2) без разделения по полу по общепризнанной технологии. С 1 по 4 день птица всех групп получала гранулированный предстартерный комбикорм с параметрами питательности согласно кроссу «Кобб Авиан 48» (307 ккал обменной энергии и 23 % сырого протеина).

В возрасте 30-34 дней были проведены физиологические опыты по определению переваримости и доступности основных питательных веществ организмом цыплят-бройлеров из опытных комбикормов (опыт 1).

Таблица 4 - Рецепты экспериментальных комбикормов для цыплят-бройлеров кросса «Кобб Авиан-48» (опыт 1)

–  –  –

* В опытных группах добавка «Винивет» вводится согласно схемы опыта Таблица 5 - Рецепты экспериментальных комбикормов для цыплят- бройлеров кросса «Хаббард» (опыт 2)

–  –  –

* В опытных группах добавка «Винивет» вводится согласно схемы опыта Опыт 3 на кроссе "Радонеж" был проведен на 90 курах-несушках со 119-дневного до 47 - недельного возраста, рецепты комбикормов приведены в таблицах 6 и 7.

–  –  –

В период опытов на бройлерах учитывали основные зоотехнические показатели: живую массу птицы в 7, 21 и 37 дней, сохранность поголовья, среднесуточный прирост живой массы, потребление и затраты корма на 1 кг прироста живой массы.

В период опыта на курах учитывали основные зоотехнические показатели: живую массу птицы в начале и конце опыта; сохранность поголовья с учетом причин отхода, интенсивность яйценоскости, упругую деформацию, массу яйца и толщину скорлупы - ежемесячно, в балансовом опыте определяли переваримость протеина, жира, клетчатки, доступность кальция, фосфора, а также лизина и метионина.

Для определения эффективности применения в комбикормах для птицы КД «Винивет» опыты проводили на цыплятах кросса "Конкурент-2» и на курах-несушках кросса «Бованс» в ООО «Племенной птицеводческий репродуктор «Юдинский» (Республика Татарстан, Зеленодольский район).

Для проведения эксперимента на курах были сформированы две группы по 490 птиц. Рацион кур состоял из зерносмеси (ячмень:пшеница – 1:1) – 68,5 г; белковой витаминно-минеральной добавки – 10,0 г; ракушек – 9,0 г; рыбной муки – 7,0 г; жмыха рапсового – 5,0 г; премикса – 0,5 г. В рацион также вносили рапсовое масло в объеме 3,5 мл. КД «Винивет» в количестве 2% от массы корма включался в рацион опытной группы птицы, начиная со 133-дневного возраста. Каждый день в течение трех месяцев определяли сохранность кур, яйценоскость и поедаемость корма.

Эксперимент по изучению влияния КД «Винивет» на рост и развитие цыплят-бройлеров проводили на кроссе «Конкурент-2» с двухнедельного возраста в течение двух месяцев. Основной рацион содержал следующие компоненты: зерновая смесь (ячмень: пшеница - 1:1) – 69,5 г; шрот подсолнечный – 15,0 г; мясокостная мука – 8,0 г; белково-витаминная минеральная добавка– 7,5 г. К основному рациону опытным группам добавляли 1% и 0,5% добавки «Винивет», контрольной группе давали основной рацион без добавки. В эксперименте определяли сохранность и прирост живой массы цыплят, а также исследовали морфобиохимический состав крови птицы.

Для определения поедаемости корма цыплятами-бройлерами были сформированы четыре группы по 50 голов 6-дневного возраста. В состав рационов первой, второй и третьей опытных групп вводилась добавка «Винивет» в концентрациях 1,5; 2,0 и 5,0%, соответственно. Контрольная группа находилась на сбалансированном по нормам питательности основном рационе следующего состава: зерносмесь (ячмень:пшеница – 1:1) - 81 г, ракушки -8,0 г, жмых рапсовый – 6,9 г, рыбная мука – 4 г, витаминная смесь

– 0,1 %. В рацион также вносили рапсовое масло в объеме 3,5 мл.

Через каждые десять дней цыплят взвешивали. Остатки корма собирались и взвешивались один раз в 7 дней. Поедаемость корма выражали в процентах.

2.5. Определение качества мяса и внутренних органов птицы Органолептический, химический и микробиологический анализы качества мяса и внутренних органов птицы проводили в соответствии с методиками, изложенными в: ГОСТ 7702.0-74. Мясо птицы. Методы отбора образцов. Органолептические методы оценки качества; ГОСТ 21237-75.

Мясо. Методы бактериологического анализа; ГОСТ 21784-76. Мясо птицы / тушки кур, уток, гусей, индеек, цесарок; ГОСТ 7269-79. Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы, определение свежести; ГОСТ 25391-82. Мясо цыплят-бройлеров; ГОСТ 26889 – 86. Продукты пищевые и вкусовые. Общие указания по определению содержания азота методом Кьелдаля; ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества; Классификация и общие требования безопасности; ГОСТ 26929-86. Сырье и продукты пищевые.

Подготовка проб. Минерализация для определения содержания токсичных элементов; ГОСТ 26933-86. Сырье и продукты пищевые. Методы определения кадмия; ГОСТ 27583-88. Яйца куриные пищевые. ГОСТ 9959Продукты мясные. Общие условия. Проведение органолептической оценки; ГОСТ 13496.19 – 93. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье.

Метод определения содержания нитратов и нитритов; ГОСТ 13496.20 – 87.

Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения остаточных количеств пестицидов; ГОСТ Р 51637-2000. Методы определения массовой доли микроэлементов.

Уровень концентрации оксипролина в мясе бедренной мышцы определяли по методу Ньюмона и Логана с применением методики кислотного гидролиза мяса по Вербицкому, а содержание триптофана определяли по методу Спайза и Чемберза в модификации Геллера.

Белковый показатель качества (БПК) мяса определяли по формуле:

БПК = С1 / С2, где:

С1 – содержание триптофана в мясе бедренной мышцы;

С2 – содержание оксипролина.

Статистический анализ данных Статистическую обработку результатов проводили в стандартной компьютерной программе Microsoft Office Excel 2007. Данные представлены в виде М ± m (среднее значение ± среднеквадратическое отклонение).

Для оценки достоверности различий между результатами в вариантах опыта использовали t-критерий Стьюдента для множественных сравнений Критический уровень (http://www.sevin.ru/seminary/statistika/lecture_3.pdf).

значимости при проверке статистических гипотез был принят за р 0,05.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Экологический мониторинг и оценка сырьевого потенциала перги и мервы как возможных источников для промышленного получения биологически активных субстанций и кормовых добавок Результаты наших исследований показали, что существует потенциальная возможность увеличения рентабельности пасечных хозяйств России за счет маловостребованных продуктов пчеловодства. Одними из перспективных продуктов пчеловодства являются пчелиная обножка (пыльца), перга и мерва.

Благодаря уникальному климатическому разнообразию России, пчелопроизводство в нашей стране практически осуществляется круглогодично. Наиболее привлекательными с этой точки зрения являются четыре Федеральных Округа, а именно Дальневосточный, Приволжский, Центральный и Южный, что определяет возможность осуществлять всесезонную заготовку вторичных продуктов пчеловодства. Структура заготовки сырья складывается из двух основных производственных циклов пчеловодства – сезонная скачка меда и подготовка пчелосемей к зимовке;

весенняя ревизия пчелосемей. Именно в эти периоды пчеловоды могут определить и заготовить излишки перговых рамок и пасечной вытопки, что ложится в основу сырьевой логистики при создании региональных производств инновационных продуктов (биологически активных субстанций, кормовых добавок и т.д.).

В соответствии с рекомендациями НИИ пчеловодства Российской Академии сельскохозяйственных наук (г.Рыбное), количество пыльцы, которую можно собрать без ущерба для жизнедеятельности пчелиной семьи, может достигать за сезон в средней полосе России от 2 до 4 кг с одного улья, а в южных районах до 6 кг и более. При этом удельный вес пыльцы в стоимости товарной продукции пчелиных пасек может составлять 15-25%.

Дополнительные затраты на её сбор не превышают 10% общих затрат, а уровень рентабельности производства достигает 130%.

Еще более ценным продуктом пчеловодства является перга (пчелиный хлеб). Объем перги, производимый одной пчелосемьей, достигает 16 кг за сезон и позволяет без ущерба для нее собирать излишки в объеме до 3 кг.

Результаты мониторинга показали, что в масштабах Российской Федерации потенциальный объем составляет 2-4 тысячи тонн. Эти цифры коррелируют с данными Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ по числу пчелосемей в России – около 3 миллионов. В настоящее время рыночная стоимость перги превышает стоимость меда в 6 раз. Таким образом, объем используемой для промышленности перги позволяет значительно повысить рентабельность пчеловодческих хозяйств России.

Наряду с этим перговые рамки (перговая сушь), особенно многократно использованные, могут являться источником всевозможных инфекций, заражать пчел паразитами (варатоз), плесневеть, приманивать грызунов, вследствие чего они должны быть своевременно изъяты или уничтожены.

Для перетопки традиционным способом – паровые воскотопки, перговая сушь не годится, т.к. подобно губке вбирает в себя пчелиный воск. Таким образом, излишки перговой суши, собранные на пасеке в плановом порядке для переработки, могут явиться источником дополнительного дохода пчеловодов; при этом своевременная выборка излишков позволяет улучшить санитарно-гигиенические и экологические показатели пасечных хозяйств.

Ценным сырьем для промышленного производства является также пасечная вытопка, содержащая от 30 до 50% воска, и заводская мерва с содержанием воска порядка 25% - отход воскоперерабатывающих заводов, образующийся в результате воздействия острого пара на пасечную вытопку.

Эти отходы до настоящего времени практически не использовались при том, что изучение состава заводской мервы (см. далее) показало высокое содержание в ней микро- и макроэлементов и протеинов. В связи с этим нами было предложено использовать мерву в производстве кормовых добавок для животноводства, в частности при кормлении птицы.

Разработка способов по переработке заводской мервы, зачастую накапливающейся на площадках воскоэкстракционных заводов, позволяет своевременно использовать эти «отходы». Отвалы мервы лежат на открытом воздухе, быстро плесневеют, становятся источником распространения восковой моли, грызунов.

В результате взаимодействия традиционных пчеловодческих структур и производств по выпуску кормовых добавок на основе «отходов» продуктов пчеловодства соблюдается фактор, определяющий экологическую чистоту предприятий, перерабатывающих пасечную вытопку. В масштабе Российской Федерации по нашим расчетам эти «отходы» ежегодно формируются в объеме 4 тысячи тонн. Следовательно, организация подобных производств в Федеральных округах, где сконцентрированы пчеловодческие хозяйства, решают не только вопрос по обеспечению отечественного птицепрома высококачественными натуральными кормовыми добавками, но и избавляют воскоперерабатывающие предприятия от утилизации отходов. Экологические санкции на сегодняшний день значительно влияют на экономику данных предприятий. В этой связи четкая плановая заготовка мервы для выпуска кормовых добавок позволяет решать как экологические, так и экономические проблемы пчеловодческих организаций и предприятий.

Эмпирические данные 20-летнего периода научно-производственной деятельности показали необходимость контроля качества вторичных сырьевых источников. Определение радиоактивности, содержания солей тяжелых металлов, наличия хлор- и фосфорорганических соединений в сырье ограничивают его заготовку в регионах, насыщенных вредными промышленными производствами, а также в зонах с интенсивным ведением сельского хозяйства. В связи с этим промышленная заготовка сырья должна учитывать экологические характеристики каждого конкретного региона.

Сравнительный анализ пасечной перги, собранной в различных регионах Приволжского Федерального Округа (Республика Татарстан, Кировская область, Ульяновская область, Республика Чувашия, Республика Марий-Эл, Республика Башкортостан, Республика Удмуртия, Республика Мордовия) показал, что наличие в перге вредных химических веществ напрямую зависит от концентрации в этих регионах промышленных предприятий и интенсивности использования в сельском хозяйстве удобрений, пестицидов, гербицидов (рисунок 5).

–  –  –

Рисунок 5 - Экологические характеристики районов заготовки перги Приволжского Федерального округа по результатам мониторинга (1993-2008 гг.).

В частности, перга, собранная в Туймазинском районе Республики Башкортостан, содержала формальдегид в количестве, превышающем предельно допустимые концентрации; образцы перги, собранной в Тукаевском и Нижнекамском районах Республики Татарстан содержали повышенные количества тяжелых металлов, а в Алексеевском районе Республики Татарстан некоторые образцы перги включали хлорорганические соединения.

Таким образом, природная перга и мерва могут обладать токсичными свойствами и приводить к тяжелым заболеваниям или отравлениям, вследствие чего они должны проходить обязательную технологическую обработку и контроль перед использованием.

3.2. Ветеринарно-санитарная оценка сырья - перги и мервы 3.2.1. Определение биохимического состава перги Нами был проведен сравнительный анализ витаминного, микро- и макроэлементного, а также аминокислотного составов пасечной перги, собранной в различных регионах Приволжского Федерального Округа (Республика Татарстан, Кировская область, Ульяновская область, Республика Чувашия, Республика Марий-Эл, Республика Башкортостан, Республика Удмуртия, Республика Мордовия), который показал, что состав перги частично зависит от разнообразия флоры конкретного региона, что определяет полифлерность или монофлерность перги, места нахождения пасеки, массивности культурных насаждений (подсолнух, гречиха, фацелия, рапс и др.), сезонности заготовки. Тем не менее, по нашим данным количественный и качественный состав микроэлементов, аминокислот, витаминов достаточно стабилен. Усредненный витаминный, макро- и микроэлементный, а также аминокислотный состав пчелиной перги на территории Приволжского Федерального округа приведен в таблице 8.

Полученные результаты согласуются с данными как российских, так и зарубежных организаций и институтов, занимающихся изучением продуктов пчеловодства (Постоянная Комиссия по технологии пчеловодства и пчеловодному оборудованию «Апимондия», Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К.А.Тимирязева, НИИ пчеловодства Российской Академии сельскохозяйственных наук, Рязанская государственная сельскохозяйственная академия им. П.А. Костычева).

Таблица 8 – Усредненный витаминный, макро- и микроэлементный и аминокислотный состав в 1 г пчелиной перги, n=80 Макро- и Витамины микроэлементы Аминокислоты Витамин А 107-200 М.E. Железо 7-10 мг Заменимые Витамин В1 15-33 мкг Калий 25-44 мг Аргинин 105-200 мг Витамин В2 54-71 мкг Кальций 18-45 мг Незаменимые Витамин В3 41-76 мкг Магний 10-14 мг Валин 186-232 мг Витамин РР 12-15 мкг Натрий 1,3-1,6 мг Гистидин 86-112 мг Витамин В6 17-22 мкг Сера 27-40 мг Изолейцин 153-204 мг Витамин В12 15 мкг Фосфор 13-24 мг Лейцин 81-252 мг Витамин В9 13-24 мкг Кремний 3-5 мг Лизин 174-260 мг Витамин C 70 мкг-41 мг Марганец 2,8-5,0 мг Метионин 54-84 мг Витамин D 55-64 мкг Медь 0,06-3,0 мг Треонин 98-128 мг Витамин E 2,6-3,6 мг Хлор 1,7-3,2 мг Триптофан 25-56 мг Витамин (H) 1,1-2,4 мкг Фенилаланин 83-164 мг Витамин P 1,8-2,4 мкг 3.2.2. Ветеринарно-санитарная оценка перги и мервы по химическим и микробиологическим показателям Сравнительный анализ химического состава образцов перги, собранной в различных регионах Поволжского, Южного и Центрального Федеральных Округов, и мервы показал, что качественный и количественный состав достаточно однороден, что согласуется с отечественными и зарубежными литературными источниками (таблица 9).

–  –  –

В ходе эксперимента по выявлению микрофлоры, населяющей перговую сушь, методом микробиологического посева на твердую питательную среду (таблица 11), на конец культивирования были ярко

–  –  –

Выявленные микроорганизмы являются условно патогенными и патогенными для человека и животных. Например, такие виды бактерий как Bacillus приводят к порче продукта, его закисанию. Микроскопические грибы рода Aspergillus fumigatus и Aspergillus niger - два устойчивых к повышенной температуре вида, которые в повышенных концентрациях опасны для человека и животных. Наличие выявленных микроорганизмов свидетельствует о том, что перга является хорошим питательным субстратом для микрофлоры, в том числе патогенной и условно патогенной, что делает ее употребление в природном виде небезопасным.

Таким образом, наряду с положительными характеристиками вторичных продуктов пчеловодства, как уникальность состава и свойств, они, в особенности перга, могут являться источниками микотоксинов, патогенных микроорганизмов, содержать соли тяжелых металлов, хлор- и фосфорорганические соединения, вследствие чего для оценки качества нами была разработана научно-техническая документация – технические условия, технологический регламент, методы контроля как на сырьевые источники пчеловодства, так и на целевые продукты на их основе.

3.2.3. Разработка научно-технической документации на сырьевые источники в рамках санитарно-гигиенических норм.

Нами разработана научно-техническая документация – технические условия, инструкции по заготовке сырья, технологический регламент по переработке исходного сырья, включающий в себя условия хранения, очистки, осушки и обеззараживания. Разработаны способы переработки сырья с целью дальнейшего получения готовой продукции.

Важнейшим этапом производственного цикла является осушествление входного контроля на предмет загрязнения сырья радионуклидами, солями тяжелых металлов, пестицидами и обсеменения патогенной и условно патогенной микрофлорой. После исключения загрязнения ксенобиотиками и различной микрофлорой определяется качество исходного сырья на содержание витаминов, макро- и микроэлементов и аминокислот. При разработке научно-технической документации с целью оптимизации производственной деятельности и заводских лабораторий маркером витаминной группы была выбрана аскорбиновая кислота, из антиоксидантовфлавоноиды. Микробиологическая чистота однозначно исключала наличие патогенных микроорганизмов, кроме допустимых значений дрожжевых грибов. Исследование проб перги и мервы на содержание тяжелых металлов, нитратов и пестицидов необходимо для исключения превышения МДУ по этим показателям уже на входном контроле. В противном случае перговая сушь и мерва в технологический процесс не допускается.

Ниже показано как проводится отбор проб с разных партий (в одной партии - перга с одного или нескольких районов) и в разные моменты времени согласно разработанных нами технических условий. Начальным этапом определения качества перги является органолептический контроль.

Органолептические исследования перги показали, что свежая перга имеет характерный запах ржаного хлеба, без затхлого, плесенного и других посторонних запахов, окрашена в темно-коричневый цвет.

Кроме того, данное сырье исследуют по показателям безопасности.

Результаты исследований приведены в таблицах 12-14.

–  –  –

Анализ образцов пчелиной перги в данных партиях установил, что по содержанию влаги, нитратов, пестицидов и токсичных элементов перга соответствуют требованиям разработанных нами технических условий.

Таким образом, анализ полученных результатов показывает, что пчелиная перга в данных партиях соответствует требованиям нормативной документации, специально разработанной нами для производства целевых продуктов на ее основе, благодаря чему достигается безопасность промышленного использования ее в качестве источника сырья.

3.3. Разработка способов переработки продуктов пчеловодства и получения биологически активных субстанций «Перга очищенная», «Мерва» и кормовой добавки «Винивет» на их основе 3.3.1. Состояние и характеристика переработки вторичного сырья пчеловодства в мире.

Пчеловодство является традиционной отраслью сельского хозяйства, производящей ценные пищевые биологически активные продукты для населения, сырье для промышленности и обеспечивающей повышение урожайности энтомофильных сельскохозяйственных культур.

Пчеловодство достигло высокого развития в США, Канаде, Австралии, Франции, Финляндии, Японии и других странах с развитым сельским хозяйством. На сегодняшний день по разным оценкам на земном шаре насчитывается свыше 50 млн. пчелиных семей. Мировой опыт свидетельствует, что для всестороннего анализа конкурентоспособности необходимо значительно большее количество параметров, чем производство меда и цена на него. Например, консалтинговая компания, подготовившая по заказу Департамента сельского хозяйства Австралии доклад о конкурентоспособности австралийского пчеловодства, оперировала данными по 82 позициям (http://www.habit.ru/28/216.html).

На эффективность пчеловодства оказывает влияние ряд природных, экономических и социальных особенностей. Наличие достаточного для жизнедеятельности пчел количества тепла, медоносной энтомофильной растительности, благоприятного рельефа местности зависят от природных особенностей, поскольку в отрасли используются биологические средства производства — пчелы и растения.

К числу важнейших экономических особенностей повышения эффективности пчеловодства относятся:

ресурсосберегающая и воспроизводственная функция пчел по отношению к культурной и дикорастущей медоносной растительности.

В настоящее время в отечественном пчеловодстве созданы основы многоукладной экономики, формируется рынок продукции пчеловодства и соответствующая, необходимая для развития отрасли инфраструктура. К преимуществам нашего пчеловодства следует отнести уникальные природноклиматические условия, огромный спектр растений-медоносов, многовековой опыт российского пчеловождения, наличие глубоких национальных корней и традиций, обширная научно-теоретическая база.

Наша страна имеет богатый потенциал для развития пчеловодства, который необходимо рационально и эффективно использовать.

По данным Росстата, за последние двадцать лет численность пчелиных семей в нашей стране сократилась с 4387,2 до 3070,0 тысяч, но при этом, благодаря росту производительности труда, производство меда увеличилось с 50485,4 до 54612,4 тонн, продуктивность пчелиной семьи при этом выросла с 11,2 до 17,3 кг меда в год [257].

В настоящее время в России пчеловодством занимаются около 5 тысяч хозяйств и примерно 300 тысяч пчеловодов-любителей, фермеров и индивидуальных предпринимателей. В результате аграрных реформ резко изменилась структура производства пчеловодной продукции по категориям хозяйств. Основными ее производителями стали хозяйства населения. Они производят более 90% меда, и им принадлежит 93,6% пчелиных семей [201].

Анализ показал, что медоносный потенциал страны позволяет существенно увеличить количество пчелиных семей в отрасли, при этом более полное освоение доступных медовых запасов обеспечит увеличение производства товарного меда в 3,0-3,5 раза.

По производству товарного меда в России первое место занимает Приволжский федеральный округ. В среднем за 2000 – 2008 гг. в нем произведено 15061,4 т товарного меда, что составляет в среднем 28,4 % от всего произведенного товарного меда в стране. Прирост производства товарного меда за анализируемый период в среднем составляет 2,1% в год [1].



Pages:   || 2 | 3 |


Похожие работы:

«БОЛЕЗНИ ОПЕРИРОВАННОГО ЖЕЛУДКА Темников А.А., Эвсен С.С. Майкопский Государственный Технологический Университет, медицинский институт Майкоп, Адыгея DISEASES OF OPERATED STOMACH Temnikov A.A., Evsen S.S. Maykop State Techno...»

«ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития» Кафедра общей хирургии с курсом урологии Наркоз. Терминальные состояния, реанимация. Кровотечение. УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ для...»

«Zeynalov Magomed Asad oqlu. Azerbaijani an State Medical institute the name of N. Narimanova the II Lechebnoprofilakticheskiy faculty, sovetnik PARADISE, Evlakh central hospital. email:mmd_59@mail.ru.“TOXIC ACTION, RAISED CONCENTRATION LEAD CONNECTIONS IN...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФАКУЛЬТЕТ СОЦИАЛЬНОЙ РАБОТЫ И КЛИНИЧЕСКОЙ ПСИХОЛОГИИ ОРГАНИЗАЦИЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТА ПО СОЦИОЛОГИИ ДЛЯ СТУДЕНТОВ СПЕЦИАЛЬНОСТИ «МЕНЕДЖМЕНТ» Учебно-методическое пособие для студентов Волгоград 2011 УДК 316(075), ББК 60.5я7 Р...»

«Приложение 14.01.02 Эндокринология ПРОГРАММА КАНДИДАТСКОГО ЭКЗАМЕНА Приложение к рабочей программе по дисциплине Эндокринология, направленной на подготовку к сдаче кандидатских экзаменов Общие положения. 1. Настоящая программа вступительного экза...»

«Содержание 1. Цель и задачи дисциплины, её место в учебном процессе.Цель преподавания дисциплины Медицинское и фармацевтическое товароведение: Сформировать профессиональные знания и умения по проведению товароведческого анализа и маркетинговых исследований медицинских и фармацевтических товаров. Товаровед...»

«Министерство Обороны Российской Федерации Государственный институт усовершенствования врачей САМОРЕГУЛЯЦИЯ ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ РАНЕНЫХ И БОЛЬНЫХ НА ОСНОВЕ МЕТОДИКИ БИОАКУСТИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ Учебно-методическое пособие Мо...»

«ПЕРВИЧНАЯ ГЛАУКОМА Лев Шахов Глаукома остается одной из наиболее актуальных и социально значимых проблем офтальмологии ввиду большой распространенности заболевания и инвалидности по зрению. По данным ВОЗ в настоящее время в мире насчитывается около 100 млн больных г...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ УТВЕРЖДАЮ Первый заместитель министра _ Р.А. Часнойть 17 июля 2008 г. Регистрационный № 014-0208 ПОСТРОЕНИЕ ДИАГНОЗА В АКУШЕРСТВЕ И ГИНЕКОЛОГИИ инструкция по применению УЧРЕЖДЕНИЕ-РАЗРАБОТЧИК: ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образова...»

«О.Н. Бурмыкина ГЕНДЕРНЫЕ РАЗЛИЧИЯ В ПРАКТИКАХ ЗДОРОВЬЯ: ПОДХОДЫ К ОБЪЯСНЕНИЮ И ЭМПИРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ В статье рассматриваются концептуальные подходы к объяснению гендерных различий в практиках здоровья и реальные практики. Анализируются биомедицинский, социомеди...»

«European Researcher, 2014, Vol.(86), № 11-1 Copyright © 2014 by Academic Publishing House Researcher Published in the Russian Federation European Researcher Has been issued since 2010. ISSN 2219-8229 E-ISSN 2224-0136 Vol. 86, No. 1...»

«КАЗИЕВА Ирина Эльбрусовна КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ИНГИБИТОРА РЕЗОРБЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ФЛАВОНОИДОВ ПРИ ДЕНТАЛЬНОЙ ИМПЛАНТАЦИИ 14.01.14 – стоматология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Н...»

«ДЖАНБЕКОВ ТИМУР АЙДАРБЕКОВИЧ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ «БОЛЬШИХ» ТРАНСПЛАНТАТОВ ЛЕВОГО ЛАТЕРАЛЬНОГО СЕКТОРА ПЕЧЕНИ У ДЕТЕЙ С НИЗКОЙ МАССОЙ ТЕЛА 14.01.24 – трансплантология и искусственные органы АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2016 Работа выполнена в Федеральном Государственном Бюджетно...»

«ИНФОРМАЦИОННЫЕ СИСТЕМЫ В КЛИНИЧЕСКОЙ ЦИТОЛОГИИ И. П. Шабалова, Кафедра клинической лабораторной диагностики РМАПО • Цитологическое исследованиепризнанный метод морфологической диагностики • Цитолог...»

«Частное профессиональное образовательное учреждение Медицинский Колледж «Авиценна» ПРИКАЗ 31.08.2016 г. г. Ставрополь № 3108 – ПП «О зачислении абитуриентов в контингент студентов ЧПОУ МК «Авиценна» На основании Приказа Министерства образования и науки России от 23 января 2014 г. № 36 «Об утверждении поря...»

«ГБУЗ КО «Кемеровская областная научная медицинская библиотека» Научная библиотека ГОУ ВПО КемГМА Росздрава ГУК «Кемеровская областная научная библиотека им. В.Д. Федорова» Медицинская литература (текущий указатель ли...»

«РАБОЧАЯ ПРОГРАММА ДИСЦИПЛИНЫ «Психиатрия и медицинская психология» наименование дисциплины Программа составлена в соответствии с требованиями ФГОС ВПО по направлению подготовки/специальности Специальность 31.05.03 Пе...»

«Ревматический энцефалит: клиника, диагностика, современная фармакотерапия Мирзоев Т.Ш., Шевченко П.П., Карпов С.М. Ставропольский Государственный Медицинский Университет Кафедра неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики Rheumatic encephalitis. Clinical manifestations. Modern methods of diagnosis and therapy....»

«И.О.Макаров, Е.В.Юдина, Е.И.Боровкова ЗАДЕРЖКА РОСТА ПЛОДА Врачебная тактика Учебное пособие Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для системы послевузовского и дополнительного профессионального образов...»

«Некоммерческая организация «Ассоциация московских вузов»ГОУ ВПО РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ Научно-обра...»

«Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное учреждение Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена Принципы примен...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИИ ГОУ ВПО «ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ РОСЗДРАВА» КАФЕДРА ФАРМАКОЛОГИИ НЕЙРОЛЕПТИКИ, ТРАНКВИЛИЗАТОРЫ, СЕДАТИВНЫЕ СРЕДСТВА УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТОВ ИРКУТСК ИГМУ УДК 615.214 (075.8) ББК 52.817.10...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ПРОПЕДЕВТИКИ ВНУТРЕННИХ БОЛЕЗНЕЙ МЕТОДЫ ОБСЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ КРОВИ И ОСНОВЫ ЧАСТНОЙ ПАТОЛОГИИ (АНЕМИИ, ЛЕЙКОЗЫ) Учебное пособие для студентов III курса лневного и IV курса вечернего отделения лече...»








 
2017 www.pdf.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - разные матриалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.