WWW.PDF.KNIGI-X.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Разные материалы
 

«УДК 615.32:547.9+543.544 ФЛАВОНОИДЫ ЦВЕТКОВ КАЛЕНДУЛЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ О.В. Шарова, В.А. Куркин* © Самарский государственный медицинский университет Росздрава, ул. Чапаевская, ...»

ХИМИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ. 2007. №1. С. 65–68.

УДК 615.32:547.9+543.544

ФЛАВОНОИДЫ ЦВЕТКОВ КАЛЕНДУЛЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ

О.В. Шарова, В.А. Куркин*

©

Самарский государственный медицинский университет Росздрава,

ул. Чапаевская, 89;Самара 443099 (Россия) Е-mail: vakur@samaramail.ru

Календула лекарственная (ноготки) – Calendula officinalis L. – (сем. Астровых или Сложноцветных – Asteraceae). Род

Calendula включает в себя около 20 видов трав и полукустарников, произрастающих в диком виде, главным образом в странах Средиземноморья. Календула лекарственная – это декоративное и лекарственное растение. В Самарской области ведется промышленное культивирование данного растения (п. Антоновка, сорт Кальта). По литературным данным, химический состав календулы лекарственной представлен каротиноидами, флавоноидами, тритерпеновыми сапонинами и рядом сопутствующих веществ. Флавоноидный состав этого растения, в соответствии с литературными данными, оказался противоречивым, поэтому нами было проведено изучение цветков календулы отечественных производителей на содержание флавоноидов.

Наряду с изокверцитрином из цветков календулы лекарственной впервые в Российской Федерации выделен доминирующий флавоноид (нарциссин), являющийся диагностическим для сырья данного растения.

Разработан способ определения подлинности цветков календулы лекарственной путем обнаружения доминирующего флавоноида – нарциссина с использованием ТСХ-анализа и ГСО рутина.



Введение Календула лекарственная, или ноготки (Calendula officilalis L.) – одно из самых популярных растений в народной и научной медицине. Препараты на основе цветков данного растения обладают широким спектром биологической активности, включая противовоспалительное, спазмолитическое, желчегонное, противомикробное, успокаивающее, противоотечное, противотоксическое, гипосенсибилизирующее, антимитотическое, репаративное, противовирусное, ранозаживляющее действие [1, 2]. Лечебные свойства календулы обусловлены наличием в сырье комплекса биологически активных соединений (БАС), а именно: каротиноидов, флавоноидов, тритерпеновых сапонинов и целого ряда сопутствующих веществ [2, 3].

В настоящее время наряду с определением внешних и микроскопических диагностических признаков значительное место в комплексной оценке подлинности и качества лекарственного растительного сырья (ЛРС) занимает фитохимический анализ.

Согласно современным требованиям нормативной документации (НД) на ЛРС, фитохимический анализ включает задачи качественного и количественного анализа ЛРС по содержанию ведущих групп БАС, обеспечивающих фармакологическую активность.

Так, в нормативной документации на сырье «Ноготков цветки» отсутствуют разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» [4], следовательно, для целей идентификации сырья не используются химические диагностические признаки. В этом отношении особый интерес представляет тонкослойная хроматография, которая в последнее время широко используется в методиках качественного анализа.

Учитывая высокое содержание флавоноидов в цветках календулы лекарственной, их несомненную значимость в проявлении биологической активности данного сырья, представляется целесообразным изучение компонентного состава календулы для обоснования возможности стандартизации данного лекарственного растительного сырья по содержанию флавоноидов.

Флавоноидный состав этого растения, в соответствии с литературными данными, оказался противоречивым [1, 3]. Так, по одному из литературных источников [5], доминирующим компонентом является рутин, а по данным другой работы – диглюкозид изорамнетина [6].



* Автор, с которым следует вести переписку.

66 О.В. ШАРОВА, В.А. КУРКИН Цель настоящей работы – проведение исследования химического состава календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, а также разработка унифицированных методик стандартизации сырья.

С целью обоснования методик качественного анализа сырья «Ноготков цветки» нами проведена препаративная хроматографическая работа по выделению и очистки соединений флавоноидной природы.

Экспериментальная часть Методика выделения флавоноидов. Измельченные воздушно-сухие цветки календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области (п. Антоновка, сорт Кальта) (100,0 г) подвергали исчерпывающему экстрагированию 70% этиловым спиртом, сочетая при этом способ мацерации (24 ч) с последующей термической экстракцией при температуре 85–90 °С. Водно-спиртовые экстракты упаривали под вакуумом до густого остатка (около 50 мл). Сгущенный экстракт высушивали на силикагеле (СГ) L 40/100, элюировали хлороформом и наносили на слой СГ, сформированный в хлороформе. Колонку элюировали флороформом и смесью хлороформ-этанол в различных соотношениях (97 : 3; 95 : 5; 93 : 7; 90 : 10; 88 : 12; 85 : 15; 80 : 20; 70 : 30).

Фракции, содержащие доминирующий флавоноид, были объединены и нанесены на полиамид с целью дальнейшей очистки. Сухой порошок (экстракт+полиамид) переносили в хроматографическую колонку (10,0 г) (высота сорбента – 4,0 см, диаметр – 5 см). Колонку элюировали водой и водным раствором спирта этилового (20; 40; 70; 96%). Контроль за разделением осуществлялся с помощью ТСХ-анализа. Основное назначение данного этапа работы – отделение основной части гидрофильных соединений (флавоноиды). В результате проведенной очистки на колонке с полиамидом было получено вещество I (доминирующий диагностический флавоноид).

Следующий блок фракций, содержащих также вещества флавоноидной природы, объединяли, упаривали и высушивали на СГ L 40/100 (1,0 г). Сухой порошок (экстракт+силикагель) переносили в хроматографическую колонку (высота сорбента – 4,0 см, диаметр – 5 см). Колонку элюировали хлороформом, содержащим этиловый спирт в различных концентрациях (5; 10; 15; 20; 25; 30; 35%). В результате было получено вещество II флавоноидного характера, имеющего желтую окраску с величиной Rf0,6.

Сравнение исследуемого доминирующего флавоноида с ГСО рутина (Rf0,4; система: хлороформ– метиловый спирт–вода – 26 : 14 : 3) по хроматографической подвижности показало, что выделенное соединение имеет другое значение Rf0,5 и, значит, этот компонент является другим флавоноидным соединением.

Для изучения строения выделенных флавоноидов (I, II) были использованы химические и спектральные методы.

Соединение I, желтые кристаллы из этанола, С28Н32О16, т. пл. 173–175 С, [ ]546 +12,0 (0,83, вода), max в этаноле: 257, 268пл., 357 нм. 1Н-ЯМР-спектр в смеси дейтероацетона и D2O (200 МГц) (Gemmini 200) : 7,97 (д, 2 Гц, Н1-2), 7,66 (дд, 2 и 8,5 Гц, Н1-6), 6,96 (д, 2 Гц, Н1-5), 6,50 (д, 2 Гц, Н1-8), 6,24 (д, 2 Гц, Н-6), 5,23 (д, 7 Гц, Н11-1 глюкопиранозы), 4,50 (д, 2 Гц, Н111-1 рамнопиранозы), 3,95 (с, 3Н, СН3О), 3,2-3,8 (10 Н сахаров), 1,04 (д, 6 Гц, СН3 рамнозы) (рис. 1)..

Спектр ЯМР 1Н нонаацетата (I) (СDСl3) : 8,08 (Н-5), 7,88 (Н-2), 7,60 (Н-6), 7,30 (Н-8), 6,80 (Н-6), 3,97 (СН3О), 3,1-5,4 (м, 12Н сахаров), 2,45 (3Н), 2,34 (3Н), 2,32 (3Н) – синглеты трех Ас-аром., 1,93-2,17 9 синглеты 6 Ас-алифат.), 1,09 (СН3 рамнозы).

Соединение II, желтые кристаллы из этанола, С21Н20О12, т. пл. 227–229 С, max (лямбда) в этаноле: 257, 267пл., 360 нм; +NaOMe 272, 327, 410 нм; +NaOAc 272, 379 нм; +NaOAc+H3BO3 262, 377 нм; +AlCl3 275, 412 нм; + AlCl3+HCl 270, 403 нм.

Соединение I при кислотном гидролизе (2% HCl, 100 °С, 1 ч) расщепляется на агликон, идентифицированный с изорамнетином (С16Н12О7, М+ 316, max (лямбда) в этаноле 257, 268 пл., 367 нм), и углеводные фрагменты – глюкозу и рамнозу. Соединение I гидролизуется ферментом рамнодиастазой, что позволяет сделать вывод о наличии в данном гликозиде биозы рутинозы. УФ-спектры с диагностическими реагентами свидетельствуют о гликозилировании 3-ОН-группы изорамнетина.

Следовательно, соединение I является 3-О-рутинозидом изорамнетина (нарциссин).

Соединение II при кислотном гидролизе дает агликон, идентифицированный как кверцетин (С15Н10О7, + М 302, max (лямбда) в этаноле 256, 267пл., 370 нм), и глюкозу. Кроме того, данный гликозид расщепляется под воздействием -гюкозидазы, что свидетельствует о -связи с агликоном. Батохромный сдвиг длинноволновой полосы в УФ-спектре агликона в присутствии AlCl3 (+60 нм) в отличие от исходного соединения (+42 нм) позволяет сделать вывод о том, что гликозилирована 3-ОН-группа. Следовательно, совокупность

ФЛАВОНОИДЫ ЦВЕТКОВ КАЛЕНДУЛЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ 67

спектральных данных и результатов химических превращений, а также непосредственное сравнение с достоверно известным образцом позволяет идентифицировать соединение как 3-О--D-глюкопиранозид кверцетина (изокверцитрин)

–  –  –

Соединение I Соединение II Для качественной оценки сырья и цветков календулы предложен ТСХ-анализ, в котором предусматривается определение доминирующего компонента – нарциссина, имеющего диагностическое значение на основе ряда изученных флавоноидов цветков календулы лекарственной. В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющих эффективно разделить и однозначно идентифицировать основные компоненты объекта.

В результате проведенных опытов с различными хроматографическими системами (хлороформ–этанол, хлороформ–метанол, хлороформ–метанол–вода в различных соотношениях) предпочтение было отдано системе растворителей хлороформ–метанол–вода (26 : 14 :3), обеспечивающей наиболее четкое разделение флавоноидов, в том числе 3-О-рутинозида изорамнетина (нарциссин) и изокверцитрина. При просмотре хроматограммы в УФ-спектре при длине 254 и 366 нм нарциссин обнаруживается в виде доминирующего пятна желто-оранжевого цвета с Rf около 0,5 (рис. 1).

Для обнаружения вещества хроматограмму просматривали в видимом свете, УФ-спектре и после проявления с раствором диазобензолсульфокислоты. При обработке реактивом хроматографические пластинки нагревались при температуре 110 С° в течение 5 мин в сушильном шкафу. При этом 3-О-рутинозид изорамнетина проявляется в виде хорошо заметного пятна желто-оранжевого цвета. Следовательно, описанная в литературе методика [5], в соответствии с которой доминирующий флавоноид цветков календулы лекарственной трактуется как рутин, требует критического пересмотра.

Рис. 1. ТСХ-анализ цветков календулы лекарственной.

«Силуфол УФ -254», система растворителей: хлороформ – метиловый спирт – вода (26 : 14 : 3); проявитель:

диазобензолсульфокислота.

Обозначения: 1. Государственный стандартный образец рутина. 2. Рабочий стандартный образец нарциссина.

3. Рабочий стандартный образец -каротина. 4. Извлечение на 40% этиловом спирте из цветков календулы лекарственной. 5. Извлечение на 70% этиловом спирте из цветков календулы лекарственной. I. 3-О-рутинозид изорамнетина (Rf0,5). II. Изокверцитрин (Rf0,6).

III. -каротин (Rf0,9) 68 О.В. ШАРОВА, В.А. КУРКИН На наш взгляд, в данной методике целесообразно использовать ГСО рутина, по физико-химическим свойствам близкий к нарциссину, так как расчет величины Rs позволит повысить объективность методики для анализируемого вещества. Кроме того, в данной методике возможно определение -(бета)-каротина с использованием рабочего стандартного образца облепихового масла (рис. 2).

Рис. 2. ЯМР-спектр 3-О-рутинозида изорамнетина в дейтероацетоне (+D2O)

Выводы

1. Из цветков календулы отечественного производства (сорт Кальта) выделен впервые в Российской Федерации доминирующий и диагностический флавоноид, идентифицированный как нарциссин (3-Орутинозид изорамнетина). В ходе исследования установлен также изокверцитрин.

2. С использованием ТСХ-анализа разработана методика качественного анализа цветков календулы лекарственной, заключающаяся в обнаружении в сырье данного растения доминирующего флавоноида – нарциссина по величине Rs относительно ГСО рутина.

Список литературы

1. Исмагилов Р.Р., Костылев Д.А. Календула. Уфа, 2000. 102 с.

2. Ладыгина, Е.Я. Календула лекарственная // Фармация. 1992. Т.40. №4. С. 84–86.

3. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. Самара, 2004. 1180 с.

4. Государственная фармакопея СССР. 11-е издание. Вып. 1 и 2. М., 1991. Т. 2.

5. Слуева, Е.К., Жукович Е.Н., Шарикова Л.А., Прибыткова Т.Ф., Деревщикова Е.Б. Оценка содержания суммы флавоноидов в настойке календулы // Фармация. 2003. Т. 51. №1. C. 13–15.

6. Абдуллабекова В.Н., Тулаганов А.А. Разработка метода количественного анализа цветков календулы лекарственной // Химико-фармацевтический журнал. 2001. Т. 35. №10. С. 25–26.

Поступило в редакцию 12 февраля 2007 г.






Похожие работы:

«УДК 616.314.163-72 Беляева Татьяна Сергеевна КОМПЛЕКСНЫЙ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЙ СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СИСТЕМ РОТАЦИОННЫХ ЭНДОДОНТИЧЕСКИХ ИНСТРУМЕНТОВ ИЗ НИКЕЛЬ-ТИТАНОВОГО СПЛАВА 14.01.14 – «Стоматология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Министерство здравоохранения Российской Федерации Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Полупроводниковый лазер «АТКУС-15» в хирургии глотки и гортани (Пособие для врач...»

«Днепропетровская государственная медицинская академия Кафедра анестезиологии и интенсивной терапии Докладчики: проф. Л.А. Мальцева к.мед.н.Н.Ф.Мосенцев Врач В.Н.Лисничая Днепропетровск 2011 Сепсис, как реакция организма на инфекцию, включает в себя такой этап развития, как синдром полиорган...»

«УТВЕРЖДЕНО РАЗРАБОТАНА Ученым советом Университета Кафедрой ветеринарной медицины (заседание кафедры от «04» сентября от «22» сентября 2014 г., протокол № 1 2014, протокол № 2) ПРОГРАММА КАНДИДАТСКОГО ЭКЗАМЕНА ПО СПЕЦИАЛЬНОЙ ДИСЦИПЛИНЕ в соответствии с темой диссертации на соискание ученой степени канд...»

«НЕГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ «РЕАВИЗ» Кафедра клинической медицины с курсом эндокринологии Е.Н. АБДАЛКИНА ОСТРЫЕ ОСЛОЖНЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА Самара УДК 61 ББК 67 A13 Абдалкина Е.Н. Острые осложнения сахарного диабета: учебное пособие для...»

«Приложение 6. Рабочая программа дисциплины «Медицинская статистика» (ОД.А.04.2) Рабочая программа дисциплины «Медицинская статистика» разработана в соответствии с Федеральными государственными требован...»

«Государственное предприятие «Украинский научный фармакопейный центр качества лекарственных средств» Чикалова С.О., Гризодуб А.И. ГП «Фармакопейный центр» Оценка неопределенности методик титрования субстанций с использованием пошагового подхода Предложены способы оценки неопределенности методик титрования су...»

«18 УДК 882-3 Рубина ПРОБЛЕМАТИКА И ПОЭТИКА РОМАНА ДИНЫ РУБИНОЙ «ПОЧЕРК ЛЕОНАРДО» Дейнега В.В., преподаватель Запорожский государственный медицинский университет В статье анализируется роман Д. Рубиной «Почерк Леонардо» (2008г.). Семантическая и структурная организация произведения позволяет не только понять определенные грани миропонимани...»







 
2017 www.pdf.knigi-x.ru - «Бесплатная электронная библиотека - разные матриалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.